HA-CS-TGF-β1復合材料對糖尿病兔種植體周圍Runx-2-ALP-OC基因的影響.pdf

1、目的：通過將羥基磷灰石（HA）、殼聚糖（CS）、轉化生長因子-β1（TGF-β1）三種材料制作成種植體表面的復合涂層，再把種植體植入于糖尿病兔的脛骨進行觀察，以便探討其周圍 Runx-2/ALP（堿性磷酸酶）/OC（骨鈣素）基因表達的改變，從分子水平評估該種植體的成骨性，減少口腔種植手術進行過程中和手術后并發(fā)癥的發(fā)生，提高種植手術的成功率。
　　方法：本實驗將純鈦種植體進行表面微弧氧化處理后制備明膠微球和HA/CS涂層并進行交聯(lián)獲

2、得改性種植體，在掃描電鏡(SEM)的微觀狀態(tài)下，觀察改性后的種植體微孔的蛋白粘附情況，并對改性種植體的表面形貌進行分析。從西南醫(yī)科大學動物實驗中心挑選兔齡相同的新西蘭長耳兔30只，隨機選取其中的18只兔，對其進行耳緣靜注四氧嘧啶（Alloxan），以便獲得SPF級的2型糖尿病實驗模型，取其中高血糖穩(wěn)定的兔12只，和剩下的正常血糖兔12只，共24只兔，分別在兔脛骨干骺端植入種植體，術后并密切監(jiān)測糖尿病兔，給予所有模型進行抗炎抗感染治療。分

3、別在進行種植植入手術后的4、8、12周取出兔脛骨上的含有種植體及周圍骨組織的樣本，待所有樣本收集齊后分別提取其RNA，采用實時定量 RT-PCR法分別檢測普通兔和糖尿病兔在不同時期、不同種植體植入后AGEs（晚期糖基化終末產物）、Runx-2、ALP、OC的表達量，收集相應數據做統(tǒng)計并繪制相應各組基因的擴增曲線和溶解曲線圖和基因表達量隨著時間變化的柱狀圖，比較實驗各組的差異。
　　結果：由掃描電子顯微鏡（SEM）分別掃描微弧氧化后

4、種植體和加載蛋白后改性種植體表面，可見微弧氧化種植體表面可見大量微孔。改性后的種植體表面存在大量加載TGF-β1蛋白的明膠微球，明膠微球的表面可見蛋白吸附，測得該明膠微球球徑為8～30μm。
　　在建模過程中2只兔行耳緣靜脈注射后死亡，1只兔術傷口感染后血糖恢復正常，其余15只兔建模成功。建模后，模型組新西蘭兔空腹血糖由5.93±0.66mmol/L增高到（18.61±4.87)mmol/L，穩(wěn)定于13.8mmol/L以上，而對照

5、組普通兔的血糖為6.12±0.62mmol/L（p<0.05）。
　　使用改性種植體的實驗組，Runx-2、ALP、OC的mRNA表達在同一時間點上高于普通種植體組（P＜0.05），正常兔子改性種植體基因表達最高，糖尿病兔改性種植體率與正常兔子正常種植體的基因表達沒有統(tǒng)計學意義，糖尿病兔植入了正常種植體的基因表達量是最低的。而隨著時間的增加，使用改性種植體的Runx-2、ALP、OC的基因表達量增加高于普通種植體（P＜0.05）。

6、AGEs的表達在普通兔子上，使用普通種植體隨時間遞增比改性種植體較快（P＜0.05），而在糖尿病兔上，使用改性種植體后，AGEs遞減較快，普通種植體不變。
　　結論：
　　1.將純鈦種植體進行表面微弧氧化處理后制備明膠微球和HA/CS涂層并進行交聯(lián)獲得改性種植體，這種方法可以穩(wěn)定將裝有圓球型的 TGF-β1蛋白明膠微球穩(wěn)定粘附在種植體上。
　　2.通過新西蘭長耳兔按照0.1g/kg藥物體重比例進行耳緣靜脈注射5％濃度的