甘蔗全長(zhǎng)丙酮酸磷酸二激酶基因的克隆.pdf

1、C4植物和C3植物相比具有光合速率高、CO2補(bǔ)償點(diǎn)低、幾乎沒有光呼吸等優(yōu)點(diǎn)，特別在強(qiáng)光、高溫、干旱等條件下，C4植物具有明顯的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)及水分和營(yíng)養(yǎng)利用率，生物產(chǎn)量也較高。
　　本實(shí)驗(yàn)的目的是從C4作物甘蔗中克隆全長(zhǎng)丙酮酸磷酸二激酶（PPDK）基因，為將其導(dǎo)入C3作物中奠定研究基礎(chǔ)。以甘蔗葉片為材料，提取其基因組DNA為模板，以GenBank上公布的甘蔗PPDK基因cDNA序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行LA-PCR(Long Acute PCR

2、)擴(kuò)增。將PCR產(chǎn)物克隆到載體中，轉(zhuǎn)化，測(cè)序。最后將全長(zhǎng)PPDK基因分兩段分別引入備用的酶切位點(diǎn)，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，實(shí)驗(yàn)室保存菌種。為檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性，以甘蔗葉片提取總RNA為模板，設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，把PCR產(chǎn)物克隆到載體，轉(zhuǎn)化，完成測(cè)序。將實(shí)驗(yàn)得到的cDNA測(cè)序結(jié)果和公布的序列以及實(shí)驗(yàn)得到的全長(zhǎng)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比較。發(fā)現(xiàn)在長(zhǎng)約2.9Kb的外顯子區(qū)域上實(shí)驗(yàn)獲得的cDNA序列存在12bp的錯(cuò)配，GenBank公布的cD