中國(guó)青島文昌魚Bam32、TAPP基因的發(fā)現(xiàn)及其相關(guān)性質(zhì)研究.pdf

1、本文綜合應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)方法與技術(shù)，從核酸水平和蛋白質(zhì)水平，對(duì)我國(guó)海洋珍稀物種青島文昌魚Bam32、TAPP基因進(jìn)行較為系統(tǒng)的研究。以期闡明Bam32、TAPP在免疫系統(tǒng)進(jìn)化過(guò)程中和其它生命活動(dòng)中的重要性和特殊性。 通過(guò)對(duì)青島文昌魚卵巢cDNA表達(dá)文庫(kù)的序列測(cè)定和生物信息學(xué)分析，獲得了編碼文昌魚TAPP的全長(zhǎng)cDNA序列。通過(guò)5'-Race的方法獲得了文昌魚Bam32全長(zhǎng)cDNA序列。文昌魚Bam32和TAPP具有一些共同的特

2、征，包括：都是小分子，缺乏酶活位點(diǎn)，C端都有一個(gè)PH結(jié)構(gòu)域。與Bam32不同的是，TAPP的N端是一個(gè)PH結(jié)構(gòu)域，而Bam32的N端是一個(gè)SH2結(jié)構(gòu)域。 本文進(jìn)行了Southernblot和基因組擴(kuò)增并測(cè)序。結(jié)果顯示文昌魚Bam32在基因組上出現(xiàn)了2個(gè)拷貝，具有8個(gè)內(nèi)含子；而文昌魚TAPP則有4個(gè)拷貝，具有10個(gè)內(nèi)含子。文昌魚的TAPP基因除了不在脊索中表達(dá)外，在鰓、消化道、卵巢和肌肉都有表達(dá)；文昌魚Bam32只在鰓、消化道和卵

3、巢中表達(dá)?？紤]到Bam32在免疫系統(tǒng)中的特殊作用以及文昌魚特殊的進(jìn)化地位，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果暗示文昌魚的鰓和消化道很可能是原始的淋巴樣組織。通過(guò)RealtimePCR，發(fā)現(xiàn)在成魚急性感染刺激后，文昌魚Bam32、TAPP的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有發(fā)生顯著的變化，似乎和炎癥反應(yīng)沒(méi)有直接關(guān)系。 最后，本文還通過(guò)體外原核融合表達(dá)得到了文昌魚Bam32、TAPP重組蛋白，純化并驗(yàn)證了文昌魚Bam32、TAPP體外特異結(jié)合PtdIns(3,4)P2的能力