水稻蛋白激酶高通量克隆表達(dá)及初步活性分析.pdf

1、分類號(hào)：Q 2 墨§密 級(jí)：壘玨Y9 3 3 7 1 6單位代碼：! Q Q 晝魚(yú)學(xué) 號(hào)：Q 3 Q 2 盟! 鯉! Q !水稻蛋白激酶高通量克隆表達(dá)及初步活性分析T h e h i g ht h r o u g h p u t c l o n i n g ，e x p r e s s i o n a n d p r e l i m i I l a r ye n z y m e a c t i V i t y a n a l

2、y s i so f r i c ep r o t e i nk i n a s e s學(xué)位申請(qǐng)人：孫健指導(dǎo)教師：劉國(guó)振教授學(xué)科專業(yè)：植物學(xué)學(xué)位類別：理學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二o o 六年六月十日T 1 l e h i g ht h r o u g h p u t d o 血g ，e x p r e s s i o Ⅱa n d p r e l i m i n a r y曲z y m e a c 協(xié)噎t ya l l a

3、 l y s i so f r i c ep r o t e i n k i l l 嬲e sA u 山0 r ：S U N J i a l lS u p e r v i s o r ：U U G u o z h e nM 匈o r ：B o 扭且yA b s t r a c tR i c e ( D 穢棚衄r 如盤．L ) i sa ni m p o r t a 【I l tf o o dc r o p ，w h i c h i sa

4、 ni Ⅱ1 p o m 【n tg e n e t i cm a t e r i a li Ⅱs t u d y i n gc m pp r 0 H d u c t i V i 哆，岫s g e n e ，h e t e r o s i s ，a n d r e s i s t a n c e ．R i c e i s a l s o ag o o dm o d e lp l a I l t f o r t l l e f u n d

5、 鋤e n “r e s e a r c h ．T h e r e a r e m o r e t } 1 a I l l 5 ∞】( i n a s e s i nr i c e ，a s t h eb i g g e s te n z y m ef 枷l ym a tr e g u l a t ep o s t 一曲n s l a t i o n a l I n o d i 蠡c a t i o n s ，p l a y i n g

6、i I n p o n a n tr o l e s i na Ⅱp r o c e s s e so fg r o w t l la n dd e V d l o p m e n t ．B u t 山e f u n c 吐o n 州d l 如o w n k i n a s e s a r ef e w ．G e n e r a l l yd O n i n ga 1 1 de x p r e s s i o no fg e I l e

7、 si st l l e c l l i e n ys t e pt o1 e a r 工lt l l e r ef u n c t i O n s ．H o w e v e rm ef 0 硼盯c l o n i n gm e m o d ss u c h a s m a p - b a s ec l o m n g o r 咖n s p o s o nt a g 百n gw h i c hb a s e do nf o r w a

8、r dg e Ⅱe t i c s c a n o n l yc l o n e do n e O rs e v e r a lg e n e S a tm e s a m e 缸m e ．N o w 也e c o m p l e t i o n0 f r i c eg e n O I r l es e q u e n c i n go f ! f e r sn e c e s s a r y c O n d i 吐O nf o r r

9、 e s e a r c h i n gk i n a s e S ’f u n c d o n s o ng e n o m el e V e l s ，a n d a l s o o 矗醯s f e a s i b i H t y f o r l a 唱e —s c a l ed o n i n gk i n a s e g e n e s ．B a s e do nr e v e r s eg e n e t i c s ，m e

10、p r i m e r sw e r ed e S i g n e du s i n gm e p u b l i s h e dr i c ek i n a s es e q u e n c e s ．n e e n c o d i n gs e q u e n c e s O fm e p r o t e i l lk i n a s e s w e r eO b t a i n e db yP C R 曲m m er i c eg

11、 e n O m e ，a n d 血e nc l o n e di n t op E ( 訊V e c t o r u s m g m e y e a s th o m O l o g O u s r e c o m b i I l a d O ns y S t 鋤．A f t e r P C R ．b a s e dV a l i d a d o no ft h er e c o m b i l l a t i n gd O n e

12、 s ，也ec 咖t c l O n e sw e r ei n d u c e dt oe x p r e s s i ny e a s tb yg a l a c t o s e ．T h ee x p r e s s e dp r o t e i nk i n a s e sw e r ea I l a l y s i s e da u t o p h o s p h o r y l a t i o nb y 曠2 P ] 冊(cè)．1

13、 1 1 e 如1 l o w i n g i st } l ee x p e r i m e n t c o n c l u s i o n s ：B a s e o nr i c ep r o t e i I lk i n a s e s e q u e Ⅱc e sw i 血o u t i n 廿o n sa n d t r a n s m e Ⅱl b 礎(chǔ)ed o m a i n s ，3 0p a i r s p I i m

14、e r s w e r e d e s i g n e di n t } l i s e x p e r i m e n t ；a I l d 2 6 e n c o d i l l g s e q u e n c e S o ft l l e s ek i n a s e s w e r e o b t a i n e d 恤D u 曲鉚or o u n d s o f P ( 、R ，e I l h a n c i l l g t

15、1 1 e e m c i e n c y o ft r a n s f b 徹撕o n ；U d l i z i n g 血ey e a s th o m 0 1 0 9 0 u sr e c O m b i n a t i o nS y s t e m ，2 3r e c O m b i l l 鋤t Sw e r eo b t a i n e d ；2 3 】( i n a s ep r o t e i n sw e r ei n

16、 d u c e dt oe x p r e s si n d i f ! f 鋤tl e v e l s ；9 k i n a s ep r o t e i n sh a V e Ⅱl ek i n a S e a c t i V 毋b y a u t o p h o s p h o r y l a t i o n a s s a y s ．T h i sw o r k i sh e l p f l l lf o r a I l t

17、i b o d yp r e p a r a d o n ，s u b s 吮t es c r e e I l i n g ，p r o t e i n —p r o t e i ni n t *a c t i O na n a l y s i s ，a n dp r o V i d e sa ne f f i c i e n ts y s t e m f o r h i g ht h r O u g h p u tc l O n i

18、n ga n de x p r e s s i o no f d c e g e n e s ．T m sw o r k i sa l s op r o V i d e s a r e f 咖c e f b r 1 鶘e ．s c a l e r e s e a r c h i n gO t I l e rf l l n c d O n a lg e n e S ．K e y w o r d s ：R i c e ； k i 王l a