β磷酸三鈣復(fù)合抗結(jié)核微球的體外、體內(nèi)釋藥研究.pdf

1、目的：
　　1.研制出可以在骨結(jié)核病灶區(qū)內(nèi)持續(xù)緩釋的大粒徑(234?m)負(fù)載兩聯(lián)抗結(jié)核藥物的微球。
　　2.摸索高效液相儀分別檢測(cè)異煙肼（INH Isoniazid)和利福平(RFP Rifampicin)藥物濃度的良好方法。
　　3.以微球質(zhì)量和包封率為標(biāo)準(zhǔn)篩選得到INH/RFP/PLGA（聚乳酸-羥基乙酸共聚物）的最佳配比組合，并用高效液相色譜法（HPLC）法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)的藥物體外釋放濃度，總結(jié)PLGA-INH-R

2、FP微球體外釋放特性。
　　4.制備出β磷酸三鈣（βTCP）復(fù)合PLGA-INH-RFP微球支架，觀察支架表征，并研究與微球的黏附性。
　　5.將復(fù)合支架植入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，檢測(cè)靜脈血漿中的血藥濃度及其成骨情況。
　　方法：
　　1.通過復(fù)乳化溶劑揮發(fā)法(W/O/W)制備載藥微球并考察微球表征。
　　2.檢測(cè)方法：色譜柱為Hanbon C18制備型色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相為:甲醇-0.

3、04mol·L-1,磷酸氫二鈉（75:25，用磷酸調(diào)節(jié)至PH值為4.5）,流速為1ml·min--1,檢測(cè)波長(zhǎng)為264nm,進(jìn)樣量為10μL。
　　3.研究微球的特性,測(cè)定載藥量、包封率及體外藥物緩釋實(shí)驗(yàn)。
　　4.分別以微球質(zhì)量的30％、40%、50%的比例與βTCP復(fù)合，使用凍干法，制備出載藥支架，測(cè)定材料的孔隙率、抗壓強(qiáng)度，在電鏡下觀察其外觀形貌。
　　5.體內(nèi)藥物代謝研究，將載藥人工骨支架,植入健康新西蘭大白兔

4、的雙側(cè)股骨髁中,分別于術(shù)后1周、4周、8周、12周、測(cè)量靜脈血漿中的藥物濃度。研究βTCP-PLGA載藥微球支架在體內(nèi)代謝情況和藥物最低抑菌濃度(MIC)維持時(shí)間。在骨密度儀、影像學(xué)、組織學(xué)切片下觀察骨修復(fù)情況。
　　結(jié)果：
　　1．自主研制出負(fù)載PLGA-INH-RFP的微球，其表面光整、飽滿，顯橙紅色且色澤均一，90%的微球直徑為234?m，較均勻。
　　2.用高效液相儀分別檢測(cè)出INH和RFP的含量，準(zhǔn)確建立標(biāo)準(zhǔn)

5、曲線與回歸方程，兩種抗結(jié)核藥物的保留時(shí)間分別是INH：1.6分鐘，RFP：3.6分鐘，內(nèi)標(biāo)物甲基睪丸素：7分鐘。以INH、RFP與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比為X軸、藥物的濃度為Y軸，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行線性分析：INH線性回歸方程y=0.6062x+0.2696 R2=0.9993；RPF線性回歸方程y=0.5574x+0.4678 R2=0.9994。
　　3.以INH：RFP：PLGA質(zhì)量比為20：15：60為最佳配比組合，測(cè)得INH載藥

6、量（%）為7.8±0.13，包封率（%）為13.71±0.89；RFP載藥量（%）為9.87±0.23，包封率（%）為31.7±0.71。體外釋藥實(shí)驗(yàn)顯示微球釋藥過程相對(duì)平穩(wěn)，突釋期微球中INH的釋放度為10.31%，到24天累積釋放度可達(dá)91.84%；突釋期微球中RFP的釋放度為7.13%，到24天累積釋放度可達(dá)78.35%。
　　4.測(cè)得微球質(zhì)量為30%、40%、50%的復(fù)合支架孔隙率分別是41.3%±1.01；42.6%±0

7、.87；44.5%±1.22；抗壓強(qiáng)度分別為1.23±0.03MPa；0.96±0.04MPa；0.58±0.02MPa。電鏡下觀察載藥微球鑲嵌在βTCP中，粒徑分布在150-200um之間，呈現(xiàn)出球體或是類球體。
　　5.在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)置入βTCP/PLGA-INH-RFP復(fù)合支架，經(jīng)過連續(xù)12周的測(cè)量，靜脈血中藥物抑菌濃度可以維持12周。影像學(xué)觀察：實(shí)驗(yàn)組術(shù)后8周股骨髁缺損處見骨密度增高影，12周時(shí)骨缺損內(nèi)骨質(zhì)完全生成。