尼古丁在腹主動脈瘤形成中的作用及分子機制研究.pdf

1、背景：吸煙是主動脈瘤形成和進展的重要危險因素，尼古丁是香煙的主要組成成分。在我們前期研究成果中，體內實驗部分，尼古丁聯(lián)合血管緊張素II誘導了10-12個月齡的雄性C57BL/6J小鼠主動脈瘤的形成，并檢測到主動脈瘤組織中p-JNK、CD68+、MMP-2和MMP-9高表達；體外實驗部分，尼古丁誘導小鼠巨噬細胞（RAW264.7）在mRNA水平VCAM-1、MMP-2和MMP-9呈劑量依賴性表達，并可能通過JNK信號通路發(fā)揮調控作用。

2、r>　　目的：在前期研究成果基礎上，為了進一步研究尼古丁對主動脈平滑肌細胞和巨噬細胞MMP-2和MMP-9蛋白表達和活性的影響及機制；以及尼古丁對主動脈平滑肌細胞趨化因子表達的調控作用，對巨噬細胞趨化性的影響，再結合趨化因子在動脈瘤組織中的定位表達，從而闡明尼古丁誘導主動脈瘤發(fā)生及早期進展的可能分子機制。
　　方法：第一部分，不同濃度尼古丁（0，0.5，5，50，500ng/ml）處理小鼠主動脈平滑肌細胞（MOVAS）和巨噬細胞（

3、RAW264.7），觀察對基質金屬蛋白酶-2（MMP-2）和基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表達和活性的影響；JNK抑制劑（SP600125）和α7-nAChRs受體激動劑（PNU-282987）處理兩種細胞，觀察對尼古丁誘導的MMP-2和MMP-9表達和蛋白活性的影響。第二部分，動物實驗部分，免疫組化染色法測定主動脈瘤組織中趨化因子MCP-1和RANTES的表達和定位；細胞實驗部分，尼古丁處理小鼠主動脈平滑肌細胞，real tim

4、e PCR法和ELISA法檢測MCP-1和RANTES表達的影響，進一步transwell法觀察尼古丁通過對MOVAS細胞的調控對巨噬細胞趨化活性的影響；JNK抑制劑SP600125和α7-nAChRs受體激動劑PNU-282987處理MOVAS細胞，real time PCR法和ELISA法檢測MCP-1和RANTES表達的影響，transwell法觀察尼古丁通過介導主動脈平滑肌細胞對巨噬細胞趨化活性的影響。
　　結果：在主動脈

5、平滑肌細胞，尼古丁以濃度依賴性方式誘導MMP-2和MMP-9的表達和活性，以及趨化因子MCP-1和RANTES的表達，0.5ng/ml和5ng/ml時明顯增強，500ng/ml時明顯抑制。而SP600125和PNU282987明顯抑制或消除了0.5ng/ml尼古丁產生的上述作用。尼古丁誘導的腹主動脈瘤組織中MCP-1和RANTES顯著高表達于中膜和外膜，尼古丁可以通過介導主動脈平滑肌細胞MCP-1和RANTES的表達調控巨噬細胞的趨化活