孟魯司特鈉對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌DU145和PC3細(xì)胞增殖、凋亡的影響.pdf

1、目的：探索藥物孟魯司特鈉對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞DU145和PC3增殖及凋亡的影響及其作用機(jī)制，為進(jìn)一步對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌的臨床治療提供新的研究方向和初步的理論依據(jù)。
　　方法：將雄激素非依賴前列腺癌DU145和PC3細(xì)胞作為本課題研究的目的細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)用藥為藥物孟魯司特鈉，設(shè)置藥物組和空白對(duì)照組，分別以不同藥物濃度（3μg/ml，1.5μg/ml）以及不同時(shí)間點(diǎn)(0h，24h，48h)的藥物作用，空白對(duì)照組不加藥物處理，

2、然后將空白組及藥物作用組分別用以下實(shí)驗(yàn)方法探究孟魯司特鈉對(duì)雄激素非依賴前列腺癌細(xì)胞DU145和PC3細(xì)胞增殖及凋亡的影響:
　　1.CCK8法，檢測(cè)藥物孟魯司特鈉作用DU145和PC3細(xì)胞后細(xì)胞活性以及生長抑制作用（增殖-毒性研究）;
　　2.普通光學(xué)顯微鏡法，觀察藥物孟魯司特鈉作用DU145和PC3細(xì)胞后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;
　　3.掃描鏡法(SEM)，進(jìn)一步證實(shí)藥物孟魯司特鈉作用DU145和PC3細(xì)胞后出現(xiàn)的細(xì)胞表面

3、超微結(jié)構(gòu)的變化;
　　4.透射電鏡法(TEM)，進(jìn)一步證實(shí)藥物孟魯司特鈉作用DU145和PC3細(xì)胞后出現(xiàn)的細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的變化;
　　5.劃痕實(shí)驗(yàn)(Cell wound scratch assay)，驗(yàn)證藥物孟魯司特鈉作用DU145和PC3細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響;
　　6.實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(Real time PCR)，檢測(cè)凋亡通路相關(guān)基因bcl2、 bax的mRNA表達(dá)，內(nèi)參基因選擇GAPDH;

4、>　　結(jié)果:
　　1.CCK8法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明孟魯司特鈉對(duì)雄激素非依賴前列腺癌細(xì)胞DU145和PC3細(xì)胞均有明顯抑制生長作用，有增殖抑制和毒性影響，且通過細(xì)胞的生長曲線可知，藥物孟魯司特鈉對(duì)DU145和PC3細(xì)胞的IC50均約為3μg/ml。
　　2.在普通倒置光學(xué)顯微鏡下觀察，明顯可見雄激素非依賴性前列腺癌DU145和PC3兩種細(xì)胞的空白對(duì)照組與藥物組在細(xì)胞形態(tài)上均有明顯差別，兩種細(xì)胞的空白對(duì)照組正常生長，而藥物組均出現(xiàn)明顯

5、細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。
　　3.掃描電鏡結(jié)果顯示在孟魯司特鈉作用雄激素非依賴性前列腺癌DU145和PC3細(xì)胞后，兩種細(xì)胞表面超微的形態(tài)結(jié)構(gòu)均出現(xiàn)了明顯的的改變。
　　4.透射電鏡結(jié)果顯示在孟魯司特鈉作用雄激素非依賴性前列腺癌DU145和PC3細(xì)胞后，兩種細(xì)胞內(nèi)部超微的形態(tài)結(jié)構(gòu)均出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。
　　5.劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)孟魯司特鈉對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞DU145和PC3的生長遷移能力有抑制作用:兩種細(xì)胞的空白對(duì)照組2

6、4h后有明顯遷移，48h后遷移愈合完全。兩種細(xì)胞的藥物組24h后沒有明顯遷移，且有細(xì)胞凋亡，48h后大量細(xì)胞凋亡，細(xì)胞遷移明顯受抑制。
　　6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，在孟魯司特鈉作用雄激素非依賴性前列腺癌DU145和PC3細(xì)胞后，兩種細(xì)胞內(nèi)基因bcl2、bax的mRNA的表達(dá)水平在不同的時(shí)間點(diǎn)和不同的藥物濃度中發(fā)生變化，并且在DU145和PC3細(xì)胞中的有差異，在孟魯斯特鈉作用PC3細(xì)胞后，bcl2和bax的mRNA的表達(dá)水平