雄激素受體負(fù)向調(diào)節(jié)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞FN1和ZNF438基因的表達(dá).pdf

1、目的：
　　驗(yàn)證FN1和ZNF438是否為雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞雄激素受體靶基因，并探索雄激素受體對(duì)FN1和ZNF438基因的表達(dá)調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　　1.采用染色質(zhì)免疫共沉淀-實(shí)時(shí)熒光定量PCR(ChIP-PCR)及瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)驗(yàn)證雄激素受體(AR)作用于FN1和ZNF438基因。
　　2.用雙氫睪酮(DHT)刺激LNCaP-AI細(xì)胞后，通過逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白質(zhì)免疫印跡

2、(Western blot)分析FN1和ZNF438基因的表達(dá)情況。
　　3.慢病毒干擾LNCaP-AI細(xì)胞雄激素受體(AR)的表達(dá)后，通過逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)分析FN1和ZNF438基因的表達(dá)情況。
　　4.慢病毒干擾LNCaP-AI細(xì)胞雄激素受體(AR)的表達(dá)后，通過CCK-8試驗(yàn)和Transwell試驗(yàn)分析LNCaP-AI細(xì)胞增殖及細(xì)胞遷移能力變化。

3、　　結(jié)果：
　　1.ChIP-PCR和瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果顯示AR-ChIP實(shí)驗(yàn)組所富集到的FN1和ZNF438基因顯著高于IgG-ChIP對(duì)照組所富集到FN1和ZNF438基因的量。
　　2.用雄激素處理LNCaP-AI細(xì)胞后，胞質(zhì)雄激素受體(AR)向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移;與此同時(shí)，LNCaP-AI細(xì)胞FN1和ZNF438基因在mRNA和蛋白水平表達(dá)下降。
　　3.用shAR慢病毒載體干擾LNCaP-AI細(xì)胞雄激素受體（AR）