版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
本課題首先通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證DU145細(xì)胞能高表達(dá)IL-8;然后,進(jìn)一步采用流式細(xì)胞術(shù)、MTT法、Transwell試驗(yàn)及免疫熒光實(shí)驗(yàn)探討IL-8抗體和IL-8R抗體能加速DU145細(xì)胞凋亡,并抑制其增殖和遷移,為臨床應(yīng)用IL-8抗體和IL-8R抗體治療雄激素非依賴性PCa提供新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
方法:
1.DU145細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-8水平的檢測(cè):分別取DU145細(xì)胞培養(yǎng)0h、12h、24h和48h上
2、清500ul,分為0h組(即為對(duì)照組)、12h組、24h組和48h組四個(gè)組,采用IL-8ELISA檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)不同培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)上清IL-8含量。
2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DU145細(xì)胞凋亡:選取DU145細(xì)胞鋪板,每孔1ml,細(xì)胞濃度5×105/ml,分別加入IL-8抗體,IL-8R抗體及加入等量培養(yǎng)基作為對(duì)照組,即anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組。24h后分別檢測(cè)三組腫瘤細(xì)胞凋亡情況。
3、3.MTT法檢測(cè)DU145細(xì)胞增殖活性:應(yīng)用MTT法分別檢測(cè)anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組腫瘤細(xì)胞增殖情況。
4.Transwell試驗(yàn)檢測(cè)DU145細(xì)胞遷移能力:應(yīng)用Transwell試驗(yàn)分別檢測(cè)anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組腫瘤細(xì)胞穿過生物膜形成克隆數(shù)多少。
5.免疫熒光結(jié)核激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)DU145細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá):應(yīng)用免疫熒光結(jié)核激光共
4、聚焦顯微鏡檢測(cè)分別檢測(cè)anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組腫瘤細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá)量。
6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,兩組間差異比較采用t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:
1.酶聯(lián)免疫法ELISA檢測(cè)IL-8濃度:0h組、12h組、24h組和48h組DU145細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-8濃度分別為(0.03±0.02)ng
5、/ml、(1.21±0.05)ng/ml、(3.10±0.05)ng/ml、(3.91±0.06)ng/ml。各組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均有P<0.001)。
2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DU145細(xì)胞凋亡率:結(jié)果顯示與空白對(duì)照組相比,DU145細(xì)胞經(jīng)IL-8/IL-8R刺激后凋亡率分別為(9.92±1.02)%和(10.34±1.07)%,均比空白對(duì)照組(1.60±0.37)%,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(T=21.2,P<0.001;T=12.5
6、,P<0.001)。
3.MTT法檢測(cè)DU145細(xì)胞增殖活性:加入IL-8抗體和IL-8R抗體后DU145細(xì)胞克隆形成減少,分別為(1.31±0.10)和(1.07±0.14),兩組OD值均顯著低于空白對(duì)照組(3.02±0.08),且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(T=9.3,P<0.001;T=5.4,P<0.001)。
4.Transwell檢測(cè)DU145細(xì)胞遷移能力:加入IL-8抗體組或IL-8R抗體組細(xì)胞穿過生物膜形成克隆數(shù)分
7、別為(49.67±3.54)個(gè)、(49.83±3.44)個(gè),均低于未加抗體的空白對(duì)照組克隆個(gè)數(shù)(164.83±4.63)個(gè),且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(T=19.3,P<0.001;T=9.3,P<0.001)。
5.免疫熒光檢測(cè)DU145細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá):未加抗體的空白對(duì)照組細(xì)胞呈現(xiàn)梭形較多,胞質(zhì)豐富,HMGB1表現(xiàn)為紅色大顆粒狀或小塊狀。而加入IL-8/IL-8R抗體后,細(xì)胞多呈現(xiàn)圓形,胞質(zhì)減少,HMGB1表達(dá)信號(hào)弱,僅呈現(xiàn)微粒
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 姜黃素對(duì)雄激素依賴性及雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用.pdf
- 雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞耐藥機(jī)制的初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 硫磺和MEIN抑制雄激素非依賴性前列腺癌生長(zhǎng)的研究.pdf
- 雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞雄激素受體靶基因的篩選和初步鑒定.pdf
- PCNA反義寡核苷酸對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞增殖抑制機(jī)制的研究.pdf
- 二甲雙胍通過雄激素受體途徑抑制雄激素依賴性和非依賴性前列腺癌.pdf
- 米非司酮抑制雄激素非依賴性前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 雄激素受體輔因子與雄激素非依賴性前列腺癌關(guān)系的研究.pdf
- TNF及PDTC誘導(dǎo)雄激素非依賴性前列腺癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 雄激素受體負(fù)向調(diào)節(jié)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞FN1和ZNF438基因的表達(dá).pdf
- EpCAM與雄激素非依賴性前列腺癌發(fā)生的相關(guān)性研究.pdf
- Hedgehog通路SMO抗體的制備及其對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌作用的研究.pdf
- MiR-200b-3p在雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞增殖的作用及其分子機(jī)制研究.pdf
- 人雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞Caveolin-1基因的表達(dá)及辛伐他汀的干預(yù)研究.pdf
- C646聯(lián)合腰果酸對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- Il-8對(duì)前列腺癌進(jìn)展作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 苦參堿對(duì)雄激素依賴性前列腺癌細(xì)胞株LNCaP的抑制作用.pdf
- 晚期轉(zhuǎn)移性雄激素非依賴性前列腺癌生存預(yù)后分析.pdf
- 激素非依賴性LNCaP前列腺癌細(xì)胞亞系模型的建立及機(jī)制的研究.pdf
- Genipin對(duì)激素非依賴性前列腺癌抑制作用及機(jī)制研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論