2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的:
  本課題首先通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證DU145細(xì)胞能高表達(dá)IL-8;然后,進(jìn)一步采用流式細(xì)胞術(shù)、MTT法、Transwell試驗(yàn)及免疫熒光實(shí)驗(yàn)探討IL-8抗體和IL-8R抗體能加速DU145細(xì)胞凋亡,并抑制其增殖和遷移,為臨床應(yīng)用IL-8抗體和IL-8R抗體治療雄激素非依賴性PCa提供新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
  方法:
  1.DU145細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-8水平的檢測(cè):分別取DU145細(xì)胞培養(yǎng)0h、12h、24h和48h上

2、清500ul,分為0h組(即為對(duì)照組)、12h組、24h組和48h組四個(gè)組,采用IL-8ELISA檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)不同培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)上清IL-8含量。
  2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DU145細(xì)胞凋亡:選取DU145細(xì)胞鋪板,每孔1ml,細(xì)胞濃度5×105/ml,分別加入IL-8抗體,IL-8R抗體及加入等量培養(yǎng)基作為對(duì)照組,即anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組。24h后分別檢測(cè)三組腫瘤細(xì)胞凋亡情況。
  

3、3.MTT法檢測(cè)DU145細(xì)胞增殖活性:應(yīng)用MTT法分別檢測(cè)anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組腫瘤細(xì)胞增殖情況。
  4.Transwell試驗(yàn)檢測(cè)DU145細(xì)胞遷移能力:應(yīng)用Transwell試驗(yàn)分別檢測(cè)anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組腫瘤細(xì)胞穿過生物膜形成克隆數(shù)多少。
  5.免疫熒光結(jié)核激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)DU145細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá):應(yīng)用免疫熒光結(jié)核激光共

4、聚焦顯微鏡檢測(cè)分別檢測(cè)anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組腫瘤細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá)量。
  6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,兩組間差異比較采用t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  結(jié)果:
  1.酶聯(lián)免疫法ELISA檢測(cè)IL-8濃度:0h組、12h組、24h組和48h組DU145細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-8濃度分別為(0.03±0.02)ng

5、/ml、(1.21±0.05)ng/ml、(3.10±0.05)ng/ml、(3.91±0.06)ng/ml。各組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均有P<0.001)。
  2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DU145細(xì)胞凋亡率:結(jié)果顯示與空白對(duì)照組相比,DU145細(xì)胞經(jīng)IL-8/IL-8R刺激后凋亡率分別為(9.92±1.02)%和(10.34±1.07)%,均比空白對(duì)照組(1.60±0.37)%,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(T=21.2,P<0.001;T=12.5

6、,P<0.001)。
  3.MTT法檢測(cè)DU145細(xì)胞增殖活性:加入IL-8抗體和IL-8R抗體后DU145細(xì)胞克隆形成減少,分別為(1.31±0.10)和(1.07±0.14),兩組OD值均顯著低于空白對(duì)照組(3.02±0.08),且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(T=9.3,P<0.001;T=5.4,P<0.001)。
  4.Transwell檢測(cè)DU145細(xì)胞遷移能力:加入IL-8抗體組或IL-8R抗體組細(xì)胞穿過生物膜形成克隆數(shù)分

7、別為(49.67±3.54)個(gè)、(49.83±3.44)個(gè),均低于未加抗體的空白對(duì)照組克隆個(gè)數(shù)(164.83±4.63)個(gè),且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(T=19.3,P<0.001;T=9.3,P<0.001)。
  5.免疫熒光檢測(cè)DU145細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá):未加抗體的空白對(duì)照組細(xì)胞呈現(xiàn)梭形較多,胞質(zhì)豐富,HMGB1表現(xiàn)為紅色大顆粒狀或小塊狀。而加入IL-8/IL-8R抗體后,細(xì)胞多呈現(xiàn)圓形,胞質(zhì)減少,HMGB1表達(dá)信號(hào)弱,僅呈現(xiàn)微粒

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