KK-42對南美白對蝦大顎器官O-甲基轉移酶基因轉錄的影響.pdf

1、甲基法昵酯(methyl famesoate,MF)是一種對甲殼動物的生長有重要的調控作用的激素,是由甲殼動物體內的大顎器官(mandibular organ,MO)合成和分泌的,類似于昆蟲體內的保幼激素(juvenile hormone,JH)。KK-42是一種保幼激素拮抗物。我們前期研究已經(jīng)證明,用KK-42處理南美白對蝦(Penaeus schmitti)蝦苗,能顯著促進其生長。但是KK-42對南美白對蝦促生長的分子機理仍不清楚。

2、為此,我們以南美白對蝦為材料,研究了KK-42對MF合成過程中一個重要的限速酶——法呢酸-O-甲基轉移酶(famesoicacid O-methyltransferase,FAMeT)基因轉錄的影響。
　　 采用浸潤法,用1.95×10-4 mol/L,的KK-42對南美白對蝦幼蝦(體長4.0-5.0 cm)進行處理,浸潤時間為1 min,然后按正常方法飼養(yǎng)。實驗過程中定期采樣,解剖取其MO,且在不同時間段抽取血淋巴。采用適當改

3、進的TRIzol一步法提取MO中總RNA,后將反轉錄產物進行熒光實時定量PCR,以檢測不同時間點FAMeT在基因轉錄水平上的變化及KK-42對其基因轉錄的影響;對于采集的血淋巴,經(jīng)過純化后,采用正相高效液相色譜(high-performance liquid chromatography,HPLC),檢測不同時間點血淋巴中MF滴度的變化及KK-42對血淋巴中MF滴度的影響。
　　 按照常規(guī)TRIzol一步法無法提取高質量的RNA

4、。本文對TRIzol一步法進行了適當?shù)母倪M,大大提高了大顎器官RNA的產率和質量。前期初步研究表明,KK-42處理后5天和10天,FAMeT基因的轉錄水平均低于同期對照組,5天處理組比同期對照組低85.1％;10天處理組比同期對照組低84.1％,且兩個時間點兩組相比均出現(xiàn)了極顯著性差異。進一步研究表明,在整個實驗觀察期內,KK-42處理組FAMeT mRNA水平均低于同期對照組,尤其在KK-42處理后第1、3、4和6天,處理組與同期對照

5、組相比有極顯著性差異,分別下降了50.9％、37.4％、63.4％和55.7％;在KK-42處理后第2、5和7天,兩組相比也出現(xiàn)了顯著性差異,處理組比同期對照組分別下降了22.1％、35.6％和23.7％。KK-42處理前后血淋巴中MF滴度也發(fā)生變化,處理后第2天,處理組與對照組相比,MF滴度降低較少。在處理后第4天和第6天,MF滴度下降較為明顯,處理組和對照組相比分別下降了18.6％和20.8％。
　　 以上結果表明,KK-4