中巴法醫(yī)昆蟲種類研究——側(cè)重麗蠅及其分子鑒定.pdf

1、近些年來(lái)越來(lái)越多的昆蟲學(xué)證據(jù)被應(yīng)用于司法實(shí)踐中，特別是在刑事案件偵破和法庭審判中起著不可低估的作用。全面了解特定地區(qū)尸體上昆蟲的種類，掌握快速準(zhǔn)確的鑒定技術(shù)以及環(huán)境因素對(duì)昆蟲種類的影響是正確利用這些昆蟲進(jìn)行法醫(yī)鑒定的基礎(chǔ)，是法醫(yī)昆蟲學(xué)研究的重要內(nèi)容。
　　 本論文分別調(diào)查分析了中國(guó)和巴基斯坦兩國(guó)代表性區(qū)域法醫(yī)昆蟲的種類與種群演替規(guī)律，以及巴基斯坦傳統(tǒng)節(jié)日一宰牲節(jié)對(duì)法醫(yī)昆蟲種類等的影響，并對(duì)杭州華家池重要類群麗蠅的分子鑒定技術(shù)進(jìn)行

2、了研究。
　　 中國(guó)杭州華家池周圍的蠅類(雙翅目:Diptera)調(diào)查結(jié)果表明:(1)華家池共有蠅類法醫(yī)昆蟲12種，其中麗蠅科Calliphoridae7種，分別為大頭金蠅Chrysomyamegacephala(Fabricius)、肥軀金蠅Ch.pinguis(Walker)、巨尾阿麗蠅Aldrichinagrahami(Aldrich)、絲光綠蠅Lucilia sericata(Meigen)、紫綠蠅L.porphyrin

3、a(Walker)、亮綠蠅L.illustris(Meigen)和瘦葉帶綠蠅Hemipyrellia ligurriens(Wiedemann)；麻蠅科Sarcophagidae一種，即肥須亞麻蠅Parasarcophagacrassipalpis(Macquart)；蠅科Muscidae4種，即家蠅Musca domestica(Linnaeus)、Musca sp.、Fannia sp.、Ophyra sp.；(2)大頭金蠅是唯一全

4、年都可以誘集到的種群，而且該種蟲口數(shù)量占絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)，而紫綠蠅蟲口數(shù)量最?。?3)2007年1月至2008年12月的調(diào)查結(jié)果顯示，麗蠅科7個(gè)種類、肥須亞麻蠅和家蠅的蟲口數(shù)量在冬季均明顯偏低，并且一月份只誘集到了大頭金蠅和家蠅兩種，二月份誘集到大頭金蠅、肥軀金蠅、巨尾阿麗蠅、家蠅等四種，三月份誘集到了大頭金蠅、肥軀金蠅、巨尾阿麗蠅、絲光綠蠅、亮綠蠅、肥須亞麻蠅、家蠅等7種；同時(shí)，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明蟲口數(shù)量在這些月份之間沒有顯著差異，但冬夏種群

5、蟲口數(shù)量差異顯著。
　　 鑒于麗蠅幼期種類在形態(tài)上難以區(qū)分，本研究以華家池采集的麗蠅為材料，選用來(lái)自線粒體基因組的COI、CYTB和ND5以及核糖體基因組的ITS1和ITS2共5個(gè)基因片段做分子標(biāo)記，對(duì)麗蠅種類的分子鑒定進(jìn)行了探索性研究。從7種麗蠅17個(gè)標(biāo)本中擴(kuò)增得到了75條基因序列并提交到GenBank。結(jié)果表明COI、Cytb、ND5和ITS2可作為麗蠅種間分子鑒定的分子標(biāo)記。ITS1序列可以作為麗蠅同屬分子鑒定的分子標(biāo)記。

6、同時(shí)，研究比較了28對(duì)蠅(包括麗蠅、家蠅)5個(gè)基因位點(diǎn)的種間差異。結(jié)果表明:在麗蠅中，(1) ITS1的種內(nèi)序列差異度為0.29-1.16％，而在種間水平上差異顯著，為7.8-57.3％，表明ITS1能夠用來(lái)進(jìn)行同屬內(nèi)近緣種類鑒定；(2)ITS2的種間差異度為1.2-19％，表明該序列能夠用于種的鑒別，但在姊妹中則可能出錯(cuò)；(3)COI序列的種內(nèi)差異度在2.2-10.4％之間，也顯示在姊妹種的鑒定上可能會(huì)錯(cuò)；(4)另一方面，CYTB和N

7、D5序列種間分歧度分別為5.2-15.4％，4.5-12.4％，表明這兩個(gè)序列均可成功用于種的鑒定。在麗蠅和家蠅組合中，(1) ITS2有30-35.2％的科間序列差異度，從而證明可作為最重要的基因標(biāo)記用于科級(jí)水平的鑒定；(2)COI的序列差異度10.3-13.5％表明在麗蠅科、家蠅科和某些麗蠅科內(nèi)種類之間(10.4％)不能明顯地區(qū)分；(3)CYTB序列的科間差異度12.5-16.7％也說明該序列在科技水平上不能明顯區(qū)分；(4)但ND5

8、序列的科間差異度16-17％則說明在可用于科級(jí)水平的鑒定；(5)結(jié)果還證明CO1、CYTB、ND5和ITS2等基因在鑒別麗蠅的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系中也很有用；(6)基于自己獲得的基因序列以及GenBank中獲得的分子數(shù)據(jù)，還推算了麗蠅科種類的演化關(guān)系?？傊?，ITS1序列具有低的種內(nèi)和高的種間差異度，可望用于近緣種的區(qū)分；ND5可用于麗蠅不同地理種群的鑒別；ITS2和ND5均表現(xiàn)出科級(jí)水平的差異顯著，COI和ITS2序列分析表明，麗蠅科和家蠅科大

9、約于20-50 MYA形成不同的進(jìn)化分支。
　　 在巴基斯坦穆斯林傳統(tǒng)節(jié)日-宰牲節(jié)期間，大量動(dòng)物尸體殘留物拋棄在外，從而引起尸食類昆蟲的大量繁殖，而目前尚無(wú)脊椎動(dòng)物在戶外垃圾場(chǎng)的降解以及與疾病傳播方面的研究報(bào)道。本文以巴基斯坦一個(gè)典型鄉(xiāng)鎮(zhèn)為代表，2008年首次對(duì)宰牲節(jié)期間產(chǎn)生的血坑、肉、皮毛和骨頭等14處場(chǎng)所進(jìn)行了調(diào)查，共發(fā)現(xiàn)35種昆蟲，其中腐肉上面發(fā)現(xiàn)的種類和數(shù)量最多；首次分析研究了分別來(lái)自巴基斯坦D.I.Khan城和Rawa