裂殖酵母中Dma1通過泛素化修飾Tip1-CLIP-170參與調(diào)控細胞極性生長的分子機制研究.pdf

1、在裂殖酵母S.pombe中，CLIP-170家族蛋白Tip1作為微管末端示蹤蛋白，能夠監(jiān)督微管使其沿著細胞的縱軸生長。另外，Tip1也參與運輸細胞極性因子到細胞末端。tip1Δ會導致細胞彎曲甚至分叉，而過表達Tip1會導致細胞不能從單極生長向雙極生長轉(zhuǎn)變。人類腫瘤抑制因子Chfr同源蛋白Dma1是紡錘體檢驗點蛋白和胞質(zhì)分裂的抑制因子，研究發(fā)現(xiàn)它會泛素化修飾SIN(septationinitialnetwork)信號途徑中的骨架蛋白Sid

2、4，導致Plo1激酶不能定位到SPB(spindlepolebody)，從而抑制SIN信號途徑和阻止胞質(zhì)分裂。
　　 我們實驗室在采用串聯(lián)親和純化方法純化Dma1蛋白復合體時，發(fā)現(xiàn)Tip1總是存在于此復合體中，定位研究顯示Dma1和Tip1在細胞末端都有定位。本研究發(fā)現(xiàn)，Dma1和Tip1在細胞末端共定位，且在胞內(nèi)有直接相互作用。我們還發(fā)現(xiàn)這兩種蛋白的體外相互作用依賴于Dma1的FHA結構域，并且Dma1結合被磷酸化的Tip1。

3、我們的研究發(fā)現(xiàn)Tip1的泛素化修飾依賴于Dma1，而且Dma1的E3泛素連接酶活性和正確定位對于Tip1的泛素化都是必須的。缺失Dma1不會明顯影響Tip1的蛋白水平，但影響Tip1的半衰期。進一步研究發(fā)現(xiàn)，依賴于Dma1的Tip1泛素化修飾在S期顯著增強，且發(fā)生在細胞末端。
　　 我們通過生化的手段對Dma1與Myo52以及Dph1在參與Tip1降解中的關系進行了研究。結果表明，缺失Myo52或Dph1會導致泛素化形式的Tip

4、1累積，而缺失Dma1后，泛素化形式的Tip1均消失。Dma1與Myo52不存在體外直接相互作用，且Dma1也不影響Myo52和Tip1的相互作用。
　　 我們還發(fā)現(xiàn)Dma1總是定位在細胞生長端，且這種末端定位受到肌動蛋白斑的調(diào)節(jié)。肌動蛋白斑通過調(diào)控Dma1的末端定位進而影響Dma1對Tip1的調(diào)控。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，缺失Tip1使細胞變長，而缺失Dma1或者Myo52會導致細胞變短。
　　 綜上所述，本研究具體闡明了D