檢測(cè)五種小分子化學(xué)物質(zhì)的蛋白芯片技術(shù)研究.pdf

1、免疫芯片是蛋白芯片的一種，芯片上的探針點(diǎn)陣，通過特異性免疫反應(yīng)捕獲樣品中的靶蛋白，然后通過激光掃描系統(tǒng)和軟件進(jìn)行圖像掃描、分析、結(jié)果定性定量檢測(cè)，該技術(shù)具有高通量、自動(dòng)化、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。 本論文是以小分子污染物為檢測(cè)對(duì)象，開展免疫芯片技術(shù)研究，由于小分子多數(shù)不具備兩個(gè)以上供抗體結(jié)合的位點(diǎn)，不適用雙抗體夾心法測(cè)定，因此，對(duì)五種小分子的檢測(cè)均采用競(jìng)爭(zhēng)法。即將小分子先與蛋白質(zhì)偶聯(lián)，然后通過Cy3對(duì)蛋白的標(biāo)記而間接標(biāo)記小分子，檢測(cè)時(shí)

2、，利用非標(biāo)記小分子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)液中偶聯(lián)物產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)強(qiáng)度確定待測(cè)物質(zhì)的含量。 該研究成功地將壬基酚、阿特拉津、雌二醇、罌粟堿和氯霉素等五種小分子物質(zhì)與卵清蛋白或牛血清白蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，偶聯(lián)物經(jīng)標(biāo)記后均能與各自的抗體結(jié)合，同時(shí)以水為樣品進(jìn)行了定性定量檢測(cè)。以阿特拉津?yàn)榇砦?，?duì)抗體芯片的制備進(jìn)行了條件優(yōu)化，結(jié)果表明，當(dāng)抗體濃度達(dá)到0.254mg/mL、封閉液選擇2％OVA或3％BSA、反應(yīng)溫度37℃、樣品稀釋液pH 7.2、抗原抗體反應(yīng)時(shí)間