草魚(Ctenopharyngodon idella)膠原凝集素(collectin)和轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin)功能的初步分析.pdf

1、本研究從已構(gòu)建的草魚(Ctenopharyngodon idella)肝腎cDNA文庫(kù)中篩選到1個(gè)克隆,經(jīng)測(cè)序和特征分析確定為草魚膠原凝集素基因(GQ141696)。草魚膠原凝集素全長(zhǎng)cDNA為1128 bp,其中5’非編碼區(qū)229 bp,3’非翻譯區(qū)104 bp,最大開(kāi)放閱讀框?yàn)?95 bp,編碼1個(gè)264 aa組成的蛋白質(zhì)。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明草魚膠原凝集素與斑馬魚的親緣關(guān)系最近。根據(jù)草魚膠原凝集素序列特征,克隆了包含糖基識(shí)別域(CRD

2、)的cDNA,并進(jìn)行原核表達(dá)、純化獲得其重組蛋白PCRD。進(jìn)行PcRD與6種細(xì)菌的凝集和糖抑制實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明半乳糖、葡萄糖、甘露糖和麥芽糖4種糖都會(huì)使PCRD與嗜水氣單胞菌的凝集明顯下降甚至極大地干擾凝集。麥芽糖使金黃色葡萄球菌的凝集明顯下降,而肽聚糖和甘露糖會(huì)使凝集受到抑制。此外,PcRD的凝集反應(yīng)不依賴Ca2+。
　　 轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin,Tf)是一種非血紅素結(jié)合鐵的β-球蛋白,其N-端和C-端的2個(gè)同源結(jié)構(gòu)域

3、由一個(gè)短鉸鏈區(qū)鏈接,草魚轉(zhuǎn)鐵蛋白每個(gè)結(jié)構(gòu)域含有4個(gè)鐵離子結(jié)合位點(diǎn),分別結(jié)合4個(gè)Fe3+。轉(zhuǎn)鐵蛋白功能廣泛,不僅參與機(jī)體鐵離子的運(yùn)輸和代謝,還在細(xì)胞呼吸、細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖中起重要作用,而且它具有抗菌殺菌功能,與機(jī)體的先天性免疫有關(guān)。為了解魚類轉(zhuǎn)鐵蛋白與鐵離子結(jié)合的分子機(jī)理以及N-端和C-端的2個(gè)同源結(jié)構(gòu)域的功能,本文根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期克隆的草魚轉(zhuǎn)鐵蛋白基因(EU790874)全長(zhǎng)cDNA序列特征,分別克隆了包含這2個(gè)結(jié)構(gòu)域的cDNA,并進(jìn)行原核