膜分離技術(shù)富集山茱萸抗風(fēng)濕組分的適用性研究與評(píng)價(jià).pdf

1、目的:以山茱萸水提液為研究對(duì)象，采用膜分離技術(shù)富集山茱萸總苷，通過(guò)體內(nèi)、體外藥效學(xué)，研究膜分離技術(shù)對(duì)山茱萸水提液中山茱萸總苷類成分抗炎生物活性的影響，以評(píng)價(jià)膜分離技術(shù)應(yīng)用于精制山茱萸水提液的適用性，為膜分離技術(shù)在中藥精制方面的進(jìn)一步應(yīng)用提供研究基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.采用LNG-CM-101實(shí)驗(yàn)室小型微濾陶瓷膜設(shè)備（微濾膜孔徑：0.8μm、0.2μm和0.05μm）和LNG-HFM-101小型中空纖維超濾膜設(shè)備（超濾膜截

2、留分子量：50 kDa、10 kDa和6 kDa）對(duì)山茱萸水提液進(jìn)行精制處理，以有效活性成分山茱萸總苷透過(guò)率和高分子（蛋白質(zhì)、果膠、鞣質(zhì)、淀粉）截留率為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，利用響應(yīng)面法優(yōu)選山茱萸水提液的膜分離精制工藝。
　　2.采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法檢測(cè)山茱萸原液、膜微濾液及超濾液對(duì)人成纖維滑膜細(xì)胞（HFLS）增殖的影響，并檢測(cè)山茱萸各樣品對(duì)白介素（IL）-1β及腫瘤壞死因子（TNF）-α誘導(dǎo)的血管內(nèi)

3、皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、白細(xì)胞介素（IL）-6的抑制作用，從體外藥效學(xué)方面評(píng)價(jià)膜分離技術(shù)富集山茱萸水提液抗炎組分的適用性。
　　3.通過(guò)建立佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，測(cè)定山茱萸原液、膜微濾液、膜超濾液及白芍總苷（TGP）對(duì)AA大鼠足趾腫脹和體重的影響。用 ELISA法檢測(cè)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-1、IL-6、前列腺素（PGE2）和TNF-α的含量，HE染色后通過(guò)顯微鏡法觀察病理切片，比較不同樣品對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的治療效果。

4、>　　結(jié)果:
　　1.山茱萸水提液膜微濾最佳工藝條件為：膜孔徑0.05μm，藥液溫度40-45℃，藥液質(zhì)量濃度0.10 g·mL-1左右，過(guò)膜壓力0.07 MPa；膜超濾最佳工藝條件為：超濾膜截留分子量10 kDa，藥液溫度50-55℃，藥液質(zhì)量濃度0.13 g·mL-1左右，過(guò)膜壓力0.10 MPa。山茱萸水提液經(jīng)膜精制后，溶液的濁度、黏度、粒徑、色差等理化參數(shù)得到明顯的改善，提高了溶液的澄明度，降低溶液中的懸浮性大顆粒及高分子

5、物質(zhì)，且使有效成分得到了很好的保留。
　　2.體外藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，山茱萸原液、膜微濾液及膜超濾液能有效抑制IL-1β誘導(dǎo)產(chǎn)生的過(guò)量炎癥細(xì)胞因子VEGF、TNF-α、IL-6和TNF-α誘導(dǎo)產(chǎn)生的過(guò)量的炎癥細(xì)胞因子VEGF、IL-6。山茱萸水提液經(jīng)膜精制后增強(qiáng)了其抗炎活性，且以膜超濾精制液抗炎活性最好。
　　3.體內(nèi)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，山茱萸原液、膜微濾液及膜超濾液能顯著下調(diào)佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）大鼠血清中炎性細(xì)胞因子IL-

6、1、IL-6、PGE2、TNF-α的水平，改善AA大鼠的炎癥程度，其中以膜超濾精制液的效果最好。病理組織切片結(jié)果表明，山茱萸各樣品能抑制AA大鼠滑膜細(xì)胞增生，降低炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度。
　　結(jié)論:采用響應(yīng)面法優(yōu)化了山茱萸水提液的膜微濾及膜超濾工藝。通過(guò)對(duì)不同膜分離技術(shù)獲得的山茱萸樣品體外抗炎作用的研究，初步闡明了其作用機(jī)制與抑制滑膜細(xì)胞過(guò)度分泌炎性細(xì)胞因子有關(guān)。通過(guò)對(duì)不同膜分離技術(shù)獲得的山茱萸樣品的體內(nèi)抗炎作用的研究，發(fā)現(xiàn)山茱萸水提液