2014年石家莊地區(qū)圍產(chǎn)期婦女B族鏈球菌的耐藥性及其耐藥基因的研究.pdf

1、目的:
　　1、掌握石家莊地區(qū)圍產(chǎn)期婦女B族鏈球菌的耐藥性和流行情況，指導(dǎo)臨床合理用藥。
　　2、采用PCR方法對(duì)B族鏈球菌耐藥基因進(jìn)行擴(kuò)增以確定其基因型別，掌握石家莊地區(qū)圍產(chǎn)期婦女B族鏈球菌的分子流行病學(xué)特點(diǎn)。
　　方法:
　　1、菌株來(lái)源
　　收集石家莊市第四醫(yī)院2014年1月至2014年12月從妊娠35～37周婦女的陰道分泌物中分離出的不重復(fù)B族鏈球菌菌株。用梅里埃ATB細(xì)菌鑒定儀并結(jié)合CAMP抑制試

2、驗(yàn)進(jìn)行B族鏈球菌菌株鑒定。
　　2、鑒定及藥敏試驗(yàn)
　　用梅里埃ATB細(xì)菌鑒定儀并結(jié)合CAMP抑制試驗(yàn)進(jìn)行B族鏈球菌菌株鑒定。藥物敏感試驗(yàn)應(yīng)用K-B紙片法進(jìn)行。以CLSI M100-S23文件(2013版)為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥敏結(jié)果判斷。
　　3、檢測(cè)細(xì)菌的耐藥基因
　　選取與B族鏈球菌紅霉素耐藥相關(guān)6種耐藥基因。采用PCR技術(shù)進(jìn)行基因擴(kuò)增。在瓊脂糖凝膠中對(duì)擴(kuò)增的基因進(jìn)行電泳分離，置于紫外凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察結(jié)果，以ma

3、ker為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷，產(chǎn)物大小與目的基因相同為陽(yáng)性，進(jìn)行照相保存其影象。
　　4、 DNA測(cè)序分析
　　從耐藥基因陽(yáng)性的mreA、mefA、ermA、ermB和mefE基因中隨機(jī)選取2～4株P(guān)CR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，并將測(cè)得的DNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，確定其基因亞型以及有無(wú)核苷酸序列的改變。
　　結(jié)果:
　　1、B族鏈球菌的檢出率
　　石家莊市第四醫(yī)院2014年1月至2014年12月，對(duì)妊娠

4、35～37周婦女陰道分泌物共計(jì)3504份標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)，分離出B族鏈球菌96株，檢出率為2.74％。
　　2、B族鏈球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果
　　對(duì)分離出的96株B族鏈球菌進(jìn)行了臨床常用的14種抗菌藥物耐藥性測(cè)定，結(jié)果顯示:
　　(1)頭孢曲松（Ceftriaxone/CRO）、哌拉西林(Piperacillin/PIP)、哌拉西林/他唑巴坦(Piperacillin-Tazobactam/TZP)、頭孢哌酮/舒巴坦(Cefpe

5、razone-Sulbactam/SCF)、頭孢孟多(Cefamandole/MA)、頭孢硫脒(Cefathiamidine/CHM)全部敏感。
　　(2)阿莫西林/克拉維酸(Amoxycillin-Clavulanie acid/AMC)、氨芐西林/舒巴坦(Ampicillin-Sulbactam/SAM)、頭孢唑林(Cefazolin/CZ)、頭孢呋辛(Cefuroxime/CXM)、青霉素(Penicillin/P)出現(xiàn)部分

6、耐藥，耐藥率分別為3.13％、2.08％、2.08％、1.04％、1.04％。
　　(3)紅霉素(Erythromycin/E)、克林霉素(Clindamycin/CC)、阿奇霉素(Azithromycin/AZM)均出現(xiàn)了較高的耐藥率，分別為(75/96)78.13％、(72/96)75.00％、(76/96)79.17％。
　　3、B族鏈球菌耐藥基因結(jié)果
　　對(duì)紅霉素耐藥的75株B族鏈球菌進(jìn)行基因檢測(cè)，檢測(cè)出耐藥基

7、因mreA、mefA、ermA、ermB和mefE的陽(yáng)性率分別為94.67％，44.00％，2.67％，73.33％，40.00％;沒(méi)有檢出ermC耐藥基因。其中不攜帶耐藥基因的有1株(1.33％)，攜帶1種耐藥基因的有7株(9.33％)，攜帶2種耐藥基因的有35株(46.67％)，攜帶3種耐藥基因的有15株(20.00％)，攜帶4種耐藥基因的有16株(21.33％)，攜帶5種耐藥基因的有1株(1.33％)。
　　4、基因測(cè)序的結(jié)

8、果
　　對(duì)五組陽(yáng)性率較高的mreA、mefA、ermA、ermB和mefE基因隨機(jī)選取2～4株進(jìn)行核苷酸序列，經(jīng)與GeneBank的參考基因序列對(duì)比顯示同源性為100％，沒(méi)有發(fā)生基因突變。
　　結(jié)論:
　　1、2014年石家莊地區(qū)圍產(chǎn)期婦女陰道分泌物B族鏈球菌檢出率為2.74％，存在較高的紅霉素、克林霉素和阿奇霉素的耐藥現(xiàn)象。
　　2、檢出的B族鏈球菌耐藥基因陽(yáng)性率從高到低依次為mreA、ermB、mefA、me