重慶地區(qū)兒童肺炎鏈球菌的型別分布、耐藥性及毒力因子保守性分析.pdf

1、目的:研究重慶地區(qū)兒童侵襲性感染分離的肺炎鏈球菌和正常兒童鼻咽部攜帶的肺炎鏈球菌的多位點(diǎn)序列分型、血清型別和耐藥性的差異，以及侵襲性菌株重要毒力因子堿基序列的保守情況。為臨床肺炎鏈球菌疾病的預(yù)防和治療以及蛋白疫苗的研發(fā)應(yīng)用提供參考。
　　方法:收集2010年至2013年重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院11歲以下兒童侵襲性感染分離出的51株肺炎鏈球菌。同時(shí)在重慶市渝中區(qū)社區(qū)醫(yī)院和幼兒園收集6歲以下無呼吸道疾病的健康兒童的咽拭子標(biāo)本，從中分離

2、得到14株肺炎鏈球菌。采用PCR擴(kuò)增這65株肺炎鏈球菌的7個(gè)管家基因:莽草酸脫氫酶(aroE)、6-磷酸葡萄糖脫氫酶（gdh）、葡萄糖激酶（gki）、轉(zhuǎn)酮醇酶（recP）、信號(hào)肽酶I（spi）、黃嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(xpt)、D-丙氨酸-D-丙氨酸連接酶（ddl），測(cè)序后在MLST數(shù)據(jù)庫中查詢得到每株菌株的序列型(ST)。并采用多重PCR的方法對(duì)它們進(jìn)行血清型分型。同時(shí)PCR擴(kuò)增51株侵襲性肺炎鏈球菌的11個(gè)毒力基因:溶血素(ply)

3、、自溶素A(lytA)、神經(jīng)氨酸酶A(nanA)、組氨酸三聚體蛋白(phtD)、酪蛋白水解蛋白酶P(clpP)、莢膜(cps2A)、細(xì)菌素(bacteriocin)、表面粘附素A(psaA)、獲鐵蛋白A(piaA)、B組鏈球菌細(xì)胞壁分離蛋白(pcsB)、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(stkP)，測(cè)序后分析堿基序列的突變情況。采用MIC法測(cè)定青霉素、左旋氧氟沙星、紅霉素等15種抗生素對(duì)65株肺炎鏈球菌的最低抑菌濃度(MIC)。
　　結(jié)果在

4、65株肺炎鏈球菌中一共檢出了19種ST。其中，ST876、ST81和ST3173在侵襲性菌株和正常攜帶菌株中均有檢出。 ST320、ST2296、ST242、ST90、ST99、ST2754、ST902、ST271、ST4112和ST3263僅出現(xiàn)在侵襲性菌株中，而ST983、ST2912、ST7759、ST3397、ST7752和ST7392僅出現(xiàn)在攜帶菌株中。同時(shí)，在這65株肺炎鏈球菌中一共檢出了11種血清型。其中，血清型14、6A

5、/6B、23F、19F在兩類菌株中均有檢出。19A、1、33/33B、11/11A、17F僅在侵襲性菌株中檢出，而血清型15和6C只出現(xiàn)在攜帶菌株中。本次研究中的侵襲性菌株和攜帶菌株對(duì)萬古霉素、利奈唑胺、左旋氧氟沙星和莫西沙星全部敏感，攜帶菌株同時(shí)還對(duì)頭孢噻肟和泰利霉素也全部敏感。侵襲性菌株對(duì)紅霉素(P=0.001)、青霉素(P=0.001)、美洛配能(P=0.018)、頭孢噻肟(P=0.007)和克林霉素(P=0.034)的不敏感率明

6、顯高于攜帶菌株，而攜帶菌株的對(duì)氯霉素(P=0.005)和四環(huán)素(P＞0.05)的不敏感率卻高于侵襲性菌株。其他4種抗生素的不敏感率均是侵襲性菌株高于攜帶菌株，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。侵襲性菌株毒力基因:ply、lytA、nanA、phtD、clpP、cps2A、bacteriocin、psaA、piaA、pcsB和stkP的堿基序列保守性分別為97.82％、96.31％、82.96％、87.50％、98.48％、83.68％、6

7、6.27％、99.46％、98.63％、88.72％和96.67％。
　　結(jié)論:19A在重慶地區(qū)兒童侵襲性肺炎鏈球菌血清型分布中所占比例最高，因此本地區(qū)兒童在接種肺炎鏈球菌疫苗時(shí)，應(yīng)首選含有19A血清型莢膜多糖抗體的PCV13。本次研究中的毒力因子ply、stkP、piaA、lytA、clpP和psaA在臨床菌株中保守性較高，具有作為肺炎鏈球菌疫苗候選蛋白的潛力。新一代大環(huán)內(nèi)酯類藥物泰利霉素可作為本地區(qū)兒童首選的抗IPD藥物。而本