擬南芥乙酰轉(zhuǎn)移酶相關(guān)基因RAT1和RAT2的分子遺傳學(xué)分析.pdf

1、本研究以GUS-CCT2(CRY2的C端)為誘餌,篩選擬南芥cDNA文庫(kù),篩選到了與之相互作用的蛋白R(shí)AT1(Related to acetyltransferase1),通過同源分析,找到與RAT1高同源性的蛋白(89.7％),稱為RAT2。RAT1和RAT2與γ-CA1、γ-CA2、γ-CA3(γ碳酸酐酶)是同源的,同時(shí)也與細(xì)菌的絲氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶同源。它們都與線粒體復(fù)合體Ⅰ有關(guān)。RAT1和RAT2蛋白定位在線粒體中,RAT1還定位在

2、細(xì)胞核內(nèi)。rat1和rat2單突變體沒有特殊表型。在rat1單突變體與rat2單突變體的雜交后代中得不到rat1rat2雙突變體。通過對(duì)R1r1r2r2和r1r1R2r2的花粉及胚胎觀察,發(fā)現(xiàn)rat1rat2雙突變體會(huì)胚胎致死,且通過轉(zhuǎn)入35S-RAT2到R1r1r2r2植株中,這種致死表型能夠恢復(fù)。由于得不到rat1rat2雙突變植株,構(gòu)建了rat2/RAT1-RNAi植株。發(fā)現(xiàn)rat2/RAT1-RNAi植株能夠正常生長(zhǎng)發(fā)育,只是生

3、長(zhǎng)發(fā)育延遲,在長(zhǎng)日照條件下開花晚。實(shí)時(shí)定量PCR研究結(jié)果表明,在rat2/RAT1-RNAi植株體內(nèi),刀的表達(dá)降低了,其它開花基因的表達(dá)水平與野生型相當(dāng)。所以rat2/RAT1-RNAi植株開花晚是由于FT的減少引起的。在對(duì)RAT1和RAT2的生化分析中發(fā)現(xiàn),在體外,RAT1沒有碳酸酐酶活性,但有明顯的乙酰轉(zhuǎn)移酶活性。我們推測(cè)由于RAT1與RAT2定位于線粒體中,且能與復(fù)合體Ⅰ作用,RAT1和RAT2就很可能通過影響能量代謝來起作用。在