擬南芥組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SDG25和組蛋白分子伴侶NAP1的功能研究.pdf

1、SET-結(jié)構(gòu)域蛋白被認(rèn)為普遍具有組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶的活性。擬南芥SET-結(jié)構(gòu)域蛋白SDG25被歸類為Trithorax家族。酶活實(shí)驗(yàn)表明，體外表達(dá)的重組SDG25蛋白能夠甲基化寡聚核小體上的組蛋白H3。T-DNA插入突變體sdg25-1具有早花表型。Western-blot和ChIP實(shí)驗(yàn)表明SDG25通過特異性調(diào)節(jié)FLC基因區(qū)域H3K36二甲基化水平從而調(diào)控FLC轉(zhuǎn)錄并參與植物開花時(shí)間的調(diào)控。
　　組蛋白分子伴侶介導(dǎo)核小體組裝去組裝

2、，在染色質(zhì)重塑和表觀遺傳調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用。組蛋白分子伴侶在酵母，動(dòng)物和植物中都保守存在并可分為H3-H4的分子伴侶和H2A-H2B的分子伴侶。核小體組裝蛋白1(NAP1)是組蛋白H2A-H2B的分子伴侶。擬南芥中有6個(gè)基因隸屬NAP1家族，根據(jù)進(jìn)化樹分析又可分成兩個(gè)亞組:NAP1亞組（AtNAP1;1-AtNAP1;4）和NRP亞組(AtNRP1，AtNRP2)。AtNAP1;4只在根的伸長區(qū)和花粉中特異性表達(dá)。另外三個(gè)全局性表達(dá)

3、的NAP1亞組基因的缺失突變體m123-1和m123-在實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)生長條件下未發(fā)現(xiàn)異常表型但對(duì)UV-C的處理相對(duì)野生型更加敏感。ChIP實(shí)驗(yàn)表明NAP1蛋白可以直接結(jié)合到核苷酸切除修復(fù)途徑基因(如AtCEN1，AtCEN2, AtXPB1)的啟動(dòng)子區(qū)和/或外顯子區(qū)從而調(diào)節(jié)這些基因的轉(zhuǎn)錄。體外損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)表明突變體總蛋白的修復(fù)效率明顯低于野生型。此外，我們發(fā)現(xiàn)在m3-2突變體中表達(dá)了一個(gè)相對(duì)AtNAP1;3末端缺失了34個(gè)氨基酸的截短蛋

4、白，AtNAP1;3T。我們研究結(jié)果表明AtNAP1;3T是植物脫落酸應(yīng)答途徑的負(fù)調(diào)控因子并且對(duì)揭示三突變m123-1和m123-對(duì)脫落酸和鹽脅迫處理的差異性提供了重要信息。
　　m123-1和m123-2三突變體對(duì)誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂的基因毒試劑博來霉素的處理相對(duì)野生型更加敏感。同源重組修復(fù)是真核生物應(yīng)對(duì)DNA雙鏈損傷的重要途徑之一。向AtNAP1/NRP突變體中導(dǎo)入GUS基因構(gòu)建的重組分子標(biāo)記，我們發(fā)現(xiàn)無論在正常生長條件或不同的