BMSCs-GFP移植治療小鼠創(chuàng)傷性腦損傷的研究.pdf

1、背景：
　　顱腦損傷是當(dāng)今社會(huì)近次于心腦血管疾病、腫瘤嚴(yán)重危害人民健康的第三大疾病，因其高死亡率及高致殘率，多年來受到人們的高度重視。近十年來，隨著手術(shù)方法及手術(shù)理念念的進(jìn)步，以及各種先進(jìn)有效的治療手段在臨床中應(yīng)用，重型顱腦損傷死亡率有了明顯下降，但致殘率卻明顯升高。大部分腦外傷患者遺留下不同程度的神經(jīng)功能障礙，例如認(rèn)知及精神障礙、失語、偏癱，甚至長(zhǎng)期植物狀態(tài)生存等。顱腦損傷所導(dǎo)致的神經(jīng)功能障礙已經(jīng)成為腦損傷治療過程中所面臨的重大

2、難題,因?yàn)閭鹘y(tǒng)的治療方無法促進(jìn)神經(jīng)元再生、修復(fù)受損的神經(jīng)元細(xì)胞。因此尋求一種安全有效的途徑修復(fù)由于創(chuàng)傷性腦損傷導(dǎo)致的腦組織結(jié)構(gòu)和功能上的損傷已經(jīng)成為當(dāng)前神經(jīng)外科面臨的一項(xiàng)重要研究課題。近年來干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，給人們帶來了希望和信心，大量研究表明干細(xì)胞移植是唯一種修復(fù)和替代壞死腦細(xì)胞的方法，可明顯改善損傷后腦細(xì)胞功能，顯示出美好的應(yīng)用前景。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone Mesenchymal-Stem Cells, BMSCs）具有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)

3、：1.來源廣泛；2.自體、異體易獲得性；3.體外可擴(kuò)增性及多向分化潛能；4.遺傳穩(wěn)定；5.低免疫原性。因此成為現(xiàn)細(xì)胞領(lǐng)域研究的焦點(diǎn)。但干細(xì)胞因其眾多不確定因素，對(duì)腦外傷治療仍初于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段。本研究通過建立小鼠創(chuàng)傷性顱腦損傷模型，經(jīng)球后靜脈移植GFP標(biāo)記的BMSC,觀察BMSC在創(chuàng)傷灶周圍的遷移及定植,以探討間充質(zhì)干細(xì)胞治療顱腦損傷的有效性及安全性。
　　目的：
　　探討經(jīng)球后靜脈叢移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）對(duì)治療創(chuàng)

4、傷性腦損傷小鼠有效性和安全性，并探討其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　采用改良Feeney法（自由落體打擊法）構(gòu)建創(chuàng)傷性腦損傷小鼠模型，90只小鼠隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、模型組及BMSCs組。BMSCs組于造模成功后1h經(jīng)球后靜脈叢注射GFP標(biāo)記的BMSC，模型組則注射等量生理鹽水，對(duì)照組只行及縫合術(shù)。觀察各組以下指標(biāo)：1,觀察傷后第6h、12h、24h、3d及7d等不同時(shí)間點(diǎn)行神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度（NSS）評(píng)分；2，通過腦組織切片

5、TTC（2,3，5-氯化三苯四唑）染色計(jì)算傷后3d及7d腦挫傷面積；3,傷后2h、6h、24h及3d利用共聚焦熒光顯微鏡觀察腦損后BMSCs-GFP在創(chuàng)傷區(qū)的遷移及定植情；4,傷后3d及14d檢測(cè)各組創(chuàng)傷區(qū)神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）及膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）。
　　結(jié)果：
　　采用自由落體打擊法成功構(gòu)建顱腦損傷小鼠模型，傷后均出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能障礙。BMSCs組自第3d腦挫傷面積較模型組明顯減小，傷后7d NSS評(píng)分

6、明顯下降，與模型組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。BMSCs-GFP移植后在腦挫傷內(nèi)及周圍可見綠色熒光分布，隨著時(shí)間的推移，綠色熒光分布量逐漸增加，提示間充質(zhì)干細(xì)胞移植后逐漸向損傷灶及周圍遷移定植。免疫組織化學(xué)結(jié)果檢測(cè)顯示，傷后3d及14d BMSCs組小鼠腦組織損傷區(qū)NSE、GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量均較對(duì)照組、模型組明顯增多，傷后14d差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　BMSC移植入創(chuàng)傷性顱腦損傷