浙江地區(qū)虎紋蛙遺傳多樣性與遺傳結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、虎紋蛙(Hoplobatrachus rugulosus)是廣泛分布于我國南方地區(qū)的大型無尾兩棲類。由于生境片段化和喪失以及人為過度的捕獵，其種群分布范圍和數(shù)量都急劇的縮小，目前已被列為國家二級保護(hù)珍稀瀕危動物，IUCN和中國物種紅色名錄均將其列為易危種，并被載入CITES附錄II。浙江省是虎紋蛙的重要分布區(qū)，然而近年來的種群數(shù)量也在極速的下降。本文從基本的珍稀瀕危兩棲類的非傷害性取樣入手，分別通過用近緣物種來跨種擴(kuò)增和磁珠富集法來篩選

2、虎紋蛙具有多態(tài)性的微衛(wèi)星位點(diǎn)，并對浙江地區(qū)的虎紋蛙遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，從而以期為該物種在浙江省的保護(hù)提供重要的理論依據(jù)。本文的主要研究結(jié)果如下： 1.通過非傷害性對虎紋蛙的血液和趾取樣獲得的DNA與通過處死后對虎紋蛙肌肉取樣獲得的DNA進(jìn)行分子遺傳學(xué)的檢測并相互比較，結(jié)果顯示三種取樣方法所獲得的DNA質(zhì)量相當(dāng)。因而，在無尾兩棲類的研究中，采用非傷害性的取樣策略完全能夠替代傷害性的取樣策略。 2.通過引用30對近

3、緣物種的外源微衛(wèi)星位點(diǎn)在虎紋蛙進(jìn)行跨種擴(kuò)增研究，結(jié)果顯示僅有33.3％的位點(diǎn)在虎紋蛙能夠獲得擴(kuò)增結(jié)果，有46.7％的位點(diǎn)完全沒有產(chǎn)生任何擴(kuò)增產(chǎn)物。認(rèn)為在進(jìn)行跨種擴(kuò)增時，所引用的物種與所需研究物種的親緣關(guān)系遠(yuǎn)近和所研究物種的基因組長度將會對跨種擴(kuò)增結(jié)果起到極大的影響。 3.利用磁珠富集法從虎紋蛙CA富集的文庫中成功篩選出9對具有多態(tài)性的微衛(wèi)星位點(diǎn)。這9個微衛(wèi)星位點(diǎn)的等位基因數(shù)目在6到11個之間(平均8.56)，觀察雜合度和期望雜合

4、度分別在0.571到0.935之間(平均0.796)和在0.765到0.888之間(平均0.837)。同時由于Hrug07位點(diǎn)存在無效等位基因，因而該引物表現(xiàn)出明顯的偏離哈溫平衡。在Hrug05和Hrug09兩個位點(diǎn)之間則存在著明顯的連鎖。 4.利用磁珠富集法所獲得的9對微衛(wèi)星位點(diǎn)對分布于浙江的7個虎紋蛙種群(n=87)進(jìn)行遺傳多樣性檢測。結(jié)果顯示，各位點(diǎn)的等位基因數(shù)均大于5個(5-13)，平均每個位點(diǎn)有7個等位基因。各種群的期

5、望雜合度均達(dá)到了較高遺傳多樣性的范疇。 5.通過對各種群瓶頸效應(yīng)的檢測，結(jié)果顯示：僅有麗水種群在近期沒有經(jīng)歷種群瓶頸效應(yīng)，而其它各種群則在IAM、TPM或SMM三種突變模型下檢測到在近期曾經(jīng)歷了種群瓶頸。 6.對各種群之間的遺傳分化進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示在總共21對樣本中，有13對(61.9％)出現(xiàn)了明顯的遺傳分化。根據(jù)Nei’s無偏差遺傳距離構(gòu)建的UPGMA聚類圖和NJ樹顯示，該7個種群可分化為分別以長山和湯溪種群為中心，