基于信號(hào)放大技術(shù)的表面等離子共振在生化分析中的應(yīng)用.pdf

1、本論文采用表面等離子共振技術(shù)，基于適體與靶分子的特異性識(shí)別特性，結(jié)合聚合酶，剪切酶等工具酶的循環(huán)放大作用及納米金生物條碼技術(shù)，構(gòu)建了一系列的放大反應(yīng)，建立了高靈敏度、高選擇性檢測溶菌酶，DNA，腫瘤細(xì)胞等腫瘤標(biāo)志物的分析新方法，本論文的研究內(nèi)容如下:
　　1、基于靶分子聚合置換循環(huán)放大方法，將生物條碼放大技術(shù)及DNA功能化的量子點(diǎn)放大技術(shù)相結(jié)合，設(shè)計(jì)了一種簡單、高效利用表面等離子共振技術(shù)檢測溶菌酶的新方法。溶菌酶作為靶蛋白質(zhì)，可以

2、與金片上的適體DNA特異性結(jié)合，打開的頸環(huán)探針與納米金生物條碼結(jié)合，將其捕獲在金基底上，在聚合酶的作用下，溶菌酶被釋放到溶液中，打開其它的頸環(huán)探針，實(shí)現(xiàn)靶蛋白質(zhì)的源頭循環(huán)放大，DNA功能化的量子點(diǎn)在流經(jīng)反應(yīng)池中與基底上的生物條碼上的探針結(jié)合，通過金基底上結(jié)合質(zhì)量的改變，達(dá)到檢測溶菌酶的目的，實(shí)驗(yàn)中溶菌酶的檢測限為1.68×10-12M，該方法新穎，簡便，實(shí)現(xiàn)了靶蛋白質(zhì)的高選擇性檢測。
　　2、構(gòu)建了基于滾環(huán)復(fù)制放大表面等離子共振檢

3、測靶DNA的新方法，將納米金生物條碼與滾環(huán)復(fù)制相結(jié)合，靶DNA通過堿基互補(bǔ)配對，將基底上的頸環(huán)DNA打開，鎖扣DNA與打開的頸環(huán)DNA末端互補(bǔ)雜交，并在T4連接酶的作用下連接成環(huán)，向體系中加入Phi29聚合酶，實(shí)現(xiàn)滾環(huán)復(fù)制放大，形成的滾環(huán)長鏈產(chǎn)物中含有大量的相同序列片段，納米金生物條碼探針作為信號(hào)增強(qiáng)元素，通過互補(bǔ)雜交，將金納米粒子捕獲到檢測基底上，增強(qiáng)SPR信號(hào)響應(yīng)，實(shí)驗(yàn)中靶DNA檢測限可達(dá)0.35pM，該方法實(shí)現(xiàn)了靶DNA的快速，高

4、靈敏度檢測，在DNA等寡核苷酸的檢測中有很大應(yīng)用空間。
　　3、提出了一種基于靶向激活多級循環(huán)放大表面等離子共振檢測靶DNA及腫瘤細(xì)胞的新方法。信號(hào)放大體系包括等溫指數(shù)循環(huán)放大、滾環(huán)復(fù)制放大及納米金信號(hào)增強(qiáng)。利用聚合酶和剪切酶的協(xié)同作用，實(shí)現(xiàn)DNA的等溫指數(shù)循環(huán)放大，并以磁性納米粒子作為“中間體”發(fā)生滾環(huán)復(fù)制反應(yīng)，磁性納米探針作為載體能夠增大滾環(huán)復(fù)制產(chǎn)物的負(fù)載量，利用金納米粒子作為信號(hào)放大探針，實(shí)現(xiàn)了DNA及腫瘤細(xì)胞的高靈敏、高選