基質(zhì)-Gla蛋白對草酸鈣晶體滯留的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:采用單一乙二醇誘導(dǎo)SD大鼠建立草酸鈣晶體動物模型;華法林失活MGP類蛋白，探討MGP類蛋白對大鼠草酸鈣晶體滯留的影響及機(jī)制。
　　方法: SD雄性大鼠50只分為對照組:空白對照組（TC組，n=11）、華法林對照組(WC組，n=12)及實(shí)驗(yàn)組:乙二醇造模組(GM組，n=12)、華法林乙二醇組（WGM組，n=15）。本實(shí)驗(yàn)采用0.75％乙二醇飲水誘導(dǎo)SD雄性大鼠形成草酸鈣晶體動物模型;華法林腹腔注射干預(yù)MGP類蛋白羧化使其失活，

2、第5天收集、分析24h尿液，第7天處死大鼠，收集血樣并檢測血鈣、磷、肌酐、尿酸等生化指標(biāo);采用顯微CT觀察鈣化及晶體分布特點(diǎn);分別采用蘇木精-伊紅(HE)染色及Von-Kossa's染色鈣鹽染色，并使用偏光顯微鏡觀察，人工分析計(jì)數(shù);免疫組織化學(xué)觀察草酸鈣晶體腎組織MGP蛋白的定位與表達(dá)。
　　結(jié)果:1、實(shí)驗(yàn)大鼠情況:實(shí)驗(yàn)過程大鼠死亡3只;體重增幅:WGM組、WC組較TC組顯著性下降;
　　2、血清生化檢測:在尿素上:GM組、

3、WC及WGM組相比TC顯著下降，并存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。血鈣上:WC、WGM組明顯低于TC、GM組并有顯著差異性，余組相比無差異性。血磷、鎂上各組比較未見顯著差異性。
　　3、24h尿生化:給藥組24h尿肌酐略高于對照組;實(shí)驗(yàn)組24h尿Ca2+、UA、P明顯低于對照組，實(shí)驗(yàn)組尿草酸明顯高于對照組，對照組及實(shí)驗(yàn)組組間比較未見明顯差異;WGM組尿Ca2+、UA、P、Ox相比TC組存在顯著性差異;WGM組在Ca2+、UA、Ox上相比WC組有顯

4、著性差異;GM組在UA、P相比對照組存在顯著差異;GM組在UA、P相比對照組存在顯著差異，Ca2+、P上相比WC組存在顯著差異性;各組尿鎂未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。尿枸櫞酸上，TC組、GM組明顯高于WC組、WGM組，WGM組相比GM組、TC組存在顯著差異性，WC組相比TC組存在顯著差異性，WGM組較WC組無明顯差異性，GM組相比TC組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性。
　　4、腎乳頭鈣化的顯微CT結(jié)果:TC組、WC組未見明顯鈣化陰影，實(shí)驗(yàn)組觀察到有鈣

5、化陰影，且WGM組較GM組出現(xiàn)鈣斑大鼠比例高，存在顯著差異，且鈣斑更明顯，廣泛。
　　5、病理染色及晶體計(jì)數(shù)比較:兩種染色對照組均未見鈣鹽染色，實(shí)驗(yàn)組在HE染色及Von-Kossa's染色中均發(fā)現(xiàn)腎小管內(nèi)草酸鈣晶體存在，腎小管腔擴(kuò)張;人工統(tǒng)計(jì)每切片上晶體數(shù)目，WGM組晶體滯留數(shù)目明顯高于GM組，且計(jì)數(shù)存在顯著差異。
　　6、免疫組化:TC組及WGM醇組在腎皮質(zhì)和髓質(zhì)腎小管上皮細(xì)胞存在廣泛染色。
　　結(jié)論:1.實(shí)驗(yàn)7天內(nèi)