miR-575在稽留流產(chǎn)的表達(dá)及作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:本研究檢測miR-575在稽留流產(chǎn)患者中的表達(dá)及臨床意義，分析其對(duì)人絨毛膜細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制，為臨床上預(yù)防和治療稽留流產(chǎn)提供可靠依據(jù)。
　　方法:(1)本研究選取2015年3月～2015年10月在本院婦產(chǎn)科門診就診的孕7周稽留流產(chǎn)的婦女30例為流產(chǎn)組，同期健康妊娠的女性30例為對(duì)照組，采集上述兩組婦女的絨毛組織，熒光定量PCR法檢測miR-575的表達(dá)，TUNEL法檢測細(xì)胞的凋亡率，分析miR-575與組織細(xì)胞凋亡的相

2、關(guān)性。(2)給JEG-3（人絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞）轉(zhuǎn)染miR-575scramble、inhibitor和mimic，將JEG-3分為control組、miR-575scramble組、miR-575inhibitor組和miR-575mimic組。檢測上述各組細(xì)胞miR-575的表達(dá);MTT法檢測增殖活性;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;熒光定量PCR法和westernblot法檢測Bcl-2、Bax、p53、VEGF、Ang-2mRNA和蛋白的表

3、達(dá);(3)生物信息學(xué)軟件預(yù)測miR-575的靶基因，構(gòu)建含有熒光素酶報(bào)告基因的SOD23'UTR WT和SOD23'UTR Mut質(zhì)粒，并與miR-575共轉(zhuǎn)染JEG-3細(xì)胞，檢測熒光素酶的表達(dá)量。熒光定量PCR和westernblot法檢測SOD2mRNA和蛋白在control組、miR-575scramble組、miR-575inhibitor組和miR-575mimic組的表達(dá)。將pc-SOD2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染JEG-3細(xì)胞，檢測cont

4、rol組和pc-SOD2組SOD2mRNA和蛋白的表達(dá);將JEG-3細(xì)胞分為control組，inhibitor組和miR-575inhibitor+pc-SOD2組，檢測各組Ang-2、VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率。
　　結(jié)果:(1)稽留流產(chǎn)組絨毛組織中miR-575的表達(dá)量高于正常對(duì)照組(P=0.033);絨毛細(xì)胞的凋亡率明顯高于正常對(duì)照組(P=0.008)?；袅鳟a(chǎn)患者絨毛組織細(xì)胞的凋亡率與miR-5

5、75的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.419，P=0.001）;(2)與miR-575scramble組相比，miR-575inhibitor組miR-575表達(dá)量明顯減少（t=3.217，P=0.044），細(xì)胞的凋亡率明顯降低（t=3.566，P=0.042）;而miR-575mimic組miR-575表達(dá)量顯著增高（t=4.773，P=0.007），細(xì)胞凋亡率顯著增高（t=3.859，P=0.023）。與miR-575scramble組相比，

6、miR-575inhibitor組細(xì)胞在48、72、96h時(shí)的增殖率明顯增高（P＜0.05），而miR-575mimic組細(xì)胞的增值率明顯降低（P＜0.05）。與miR-575scramble組相比，miR-575inhibitor組Bcl-2、Ang-2和VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)量明顯增高，Bax、p53mRNA和蛋白的表達(dá)量明顯減少;而miR-575mimic組Bcl-2、Ang-2和VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)量明顯減少，

7、Bax、p53mRNA的表達(dá)量明顯增高（P＜0.05）。(3)SOD2被預(yù)測為miR-575的靶基因。與正常對(duì)照組相比，稽留流產(chǎn)組患者絨毛組織中SOD2mRNA(t=3.122，P=0.048)和蛋白(t=3.245，P=0.046)的表達(dá)量均明顯減少。miR-575inhibitor+SOD23'UTR WT組熒光素酶的表達(dá)量明顯低于miR-control+SOD23'UTRWT組(t=4.618,P=0.005),miR-575in

8、hibitor+SOD23'UTR Mut組熒光素酶的表達(dá)量與miR-control+SOD23'UTR Mut組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.245，T=0.911)。與control組相比，pc-SOD2組SOD2mRNA(t=0.349，P=0.044)和蛋白(t=0.388，P=0.040)的表達(dá)量明顯增高。與Scramble組相比，mimic組SOD2mRNA和蛋白的表達(dá)量明顯降低(P＜0.01)，inhibitor組則明顯增高(P＜

9、0.01)。與control組相比，inhibitor組Ang-2、VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)量均明顯增高(P＜0.05)，細(xì)胞凋亡率明顯減少(P＜0.01);inhibitor+pc-SOD2組Ang-2、VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)量則明顯減少(P＜0.05)，細(xì)胞凋亡率則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:miR-575通過靶向抑制SOD2的表達(dá)，進(jìn)而降低Ang-2的表達(dá)促進(jìn)絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，通過抑制VEGF的表達(dá)來