二氫楊梅素對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的抗炎抗凋亡機(jī)制研究.pdf

1、缺血性腦血管病的發(fā)病率在全部腦血管病中占據(jù)了80％的比例，已超過(guò)心臟病和惡性腫瘤，在我國(guó)致死性疾病中居于首位。由于發(fā)病率、致殘率、病死率高的特點(diǎn)，使得該病一直以來(lái)都是臨床的一大危險(xiǎn)信號(hào)，備受研究關(guān)注。腦缺血損傷的發(fā)生發(fā)展，涉及到一系列極其復(fù)雜的病理生理過(guò)程,各因素之間相互作用導(dǎo)致了最終的損傷形成。到目前為止，研究發(fā)現(xiàn)的常見(jiàn)機(jī)制主要包括自由基損傷、興奮性氨基酸過(guò)量、Ca2+胞內(nèi)積聚、細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)等。二氫楊梅素(Dihydromyri

2、cetin，DMY)是我國(guó)廣西和湖南省的壯族、瑤族民間習(xí)用草藥藤茶的主要黃酮類成分，多項(xiàng)研究表明DMY均具有多種藥理活性。本課題組前期研究表明DMY500mg?kg-1可以明顯降低小鼠局灶性腦缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷后神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死體積和腦含水量，對(duì)局灶性腦I/R損傷具有一定的保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制與抗氧化有關(guān)。
　　本課題擬在建立改良線栓法制備小鼠大腦中動(dòng)脈阻塞/再灌注（midd

3、le cerebral artery occlusion/reperfusion，MCAO/R）局灶性腦缺血模型的基礎(chǔ)上，從抗炎抗凋亡方面進(jìn)一步研究DMY對(duì)小鼠腦I/R損傷的保護(hù)機(jī)制，為開(kāi)發(fā)DMY為新型抗腦缺血腦病藥物提供可靠的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　第一部分：DMY對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后炎癥反應(yīng)的影響
　　目的觀察DMY對(duì)小鼠局灶性I/R損傷后腦組織炎癥反應(yīng)和5-脂氧酶（5-lipoxygenase，5-LOX）

4、的影響。
　　方法雄性昆明種小鼠隨機(jī)分為3組，即假手術(shù)組、I/R模型組及DMY（500mg?kg-1）組。改良線栓法制備小鼠局灶性腦缺血（3h）再灌注（24h）損傷模型。術(shù)前連續(xù)灌胃給藥10d，每天1次，并在缺血前1h及再灌注后12h各給藥1次。再灌注24h后取腦，免疫組織化學(xué)檢測(cè)5-LOX與小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物離子鈣接頭蛋白(ionized calcium binding adaptor molecule1，Iba1)表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光

5、定量 PCR法檢測(cè)小鼠腦組織5-LOX mRNA表達(dá)；ELISA法檢測(cè)缺血腦組織勻漿5-LOX代謝物白三烯B4（leukotrienes B4，LTB4）和半胱氨酰白三烯（cysteinyl leukotrienes，CysLTs）以及炎癥因腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量。
　　結(jié)果與模型組比較，DMY500mg?kg-1抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化并降低TNF-α水平，同時(shí)降低缺血腦組織5-

6、LOX蛋白和mRNA的表達(dá)，并減少LTB4與CysLTs的產(chǎn)生（P﹤0.05或P﹤0.01）。
　　結(jié)論 DMY可減輕局灶性腦I/R損傷炎癥反應(yīng)，可能是通過(guò)抑制5-LOX而起作用。
　　第二部分：DMY對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后細(xì)胞凋亡的影響
　　目的觀察小鼠局灶性I/R損傷后神經(jīng)元凋亡及 Bax、Bcl-2表達(dá)變化，研究DMY對(duì)腦I/R損傷小鼠的抗凋亡作用。
　　方法采用改良線栓法阻塞小鼠大腦中動(dòng)脈,建立I

7、/R損傷模型,將小鼠隨機(jī)分成3組:I/R模型組、假手術(shù)組、DMY組，處理方法同第一部分，缺血3h再灌注24h后取小鼠腦組織，行TUNEL染色檢測(cè)凋亡陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)；采用免疫組織化學(xué)法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)Bax/Bcl-2蛋白、mRNA水平表達(dá)。
　　結(jié)果再灌注24 h，DMY可以減少缺血后腦組織中 TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞(P﹤0.01，DMY vs.I/R)，下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白 Bax，上調(diào) Bcl-2表達(dá)。
　　結(jié)論 DMY