清腦益髓調(diào)督電針法對MCAO大鼠腦組織中微血管數(shù)量及形態(tài)學(xué)變化的影響.pdf

1、目的:本課題旨在通過研究清腦益髓調(diào)督電針法，對MCAO大鼠腦組織中微血管數(shù)量及形態(tài)學(xué)變化的影響，探討該法對改善MCAO大鼠神經(jīng)功能缺損的作用機(jī)理。
　　方法:
　　1.清腦益髓調(diào)督電針法對MCAO大鼠神經(jīng)功能評分和腦梗死面積的影響:選健康雄性SD大鼠72只，隨機(jī)分為:假手術(shù)組、模型組、電針組（清腦益髓調(diào)督組）和藥物組（氯吡格雷片組）四組，每組又分為1d、3d、7d三個(gè)亞組。假手術(shù)組切開皮膚，分離左側(cè)CCA、ICA、ECA，但

2、不作任何處理;其余各組均采用Zea-Longa報(bào)道的MCAO方法建造腦缺血模型并進(jìn)行改良，模型組不作治療處理;藥物組給予氯吡格雷片灌胃;清腦益髓調(diào)督組給予電針（水溝、百會(huì)、大椎、至陽、命門）;各組于各時(shí)間點(diǎn)處死大鼠(n=6)。采用神經(jīng)病學(xué)Longa等評定神經(jīng)功能缺損的方法對各亞組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行神經(jīng)功能評分，HE切片染色觀察腦組織形態(tài)改變，TTC染色方法測定腦梗死面積變化。
　　2.清腦益髓調(diào)督電針法對MCAO大鼠微血管密度及微血管直

3、徑的影響:實(shí)驗(yàn)造模及分組、給藥及針刺方法同前。大腦皮層缺血區(qū)微血管密度檢測采用IHC抗生物素蛋白一過氧化酶(S-P)染色法;按Weidener等方法進(jìn)行MVD計(jì)數(shù)。標(biāo)記血漿的右旋糖苷用異硫氰酸熒光素(FITC-dextran)標(biāo)記后，共聚焦顯微鏡下觀察腦微血管形態(tài)及測量其直徑。
　　結(jié)果:
　　1.清腦益髓調(diào)督電針法對MCAO大鼠神經(jīng)功能缺損評分和腦梗死面積的影響
　　1.1各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，

4、各組隨時(shí)間延長:假手術(shù)組無神經(jīng)功能缺損癥狀;模型組、清腦益髓調(diào)督組及藥物組大鼠神經(jīng)功能缺損評分均逐漸減小，均為7d優(yōu)于1d、3d，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn):清腦益髓調(diào)督組及藥物組與模型組相比，均有顯著性差異，且藥物組大鼠的神經(jīng)功能缺損評分較清腦益髓調(diào)督電針組稍好，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　1.2組織形態(tài)學(xué)結(jié)果。假手術(shù)組大鼠腦組織為正常細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞間連接緊密，為完整基底膜。模型組大鼠較正常組細(xì)胞周圍間隙明顯增寬，且神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生腫

5、脹，大小不一，排列較紊亂，細(xì)胞核固縮染色較深，部分胞質(zhì)發(fā)生自溶，周圍出現(xiàn)較大空泡，毛細(xì)血管萎縮，缺血腦組織形態(tài)嚴(yán)重改變。藥物組和清腦益髓調(diào)督組大鼠均可見神經(jīng)細(xì)胞缺血性程度較模型組明顯減輕，細(xì)胞輕度腫脹，間質(zhì)較致密，壞死細(xì)胞數(shù)量明顯減少。模型組、藥物組、清腦益髓調(diào)督組隨著時(shí)間1、3、7d，時(shí)間越長神經(jīng)稀薄缺血性改變減輕越明顯。與模型組比較，其中藥物組和清腦益髓調(diào)督組可見壞死細(xì)胞數(shù)量明顯減少，血管和神經(jīng)細(xì)胞周圍間隙增寬程度明顯減輕缺血性神經(jīng)

6、細(xì)胞改變明顯減輕。藥物組和清腦益髓調(diào)督組之間壞死細(xì)胞數(shù)量、神經(jīng)和血管周圍間隙無明顯區(qū)別。
　　1.3腦梗死面積測定結(jié)果。假手術(shù)組腦梗死而積無表達(dá)。在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)1d、3d、7d，清腦益髓調(diào)督組和藥物組與模型組比較均能明顯減少大鼠腦梗死面積，且清腦益髓調(diào)督組與藥物組無明顯差異。各組內(nèi)即模型組、清腦益髓調(diào)督組和藥物組于7d腦梗死面積均明顯減少，且減少程度優(yōu)于1d和3d。
　　2.清腦益髓調(diào)督電針法對MCAO大鼠微血管密度、微血管直

7、徑的影響
　　2.1微血管密度測定結(jié)果。陽性細(xì)胞表達(dá)于微血管內(nèi)皮細(xì)胞，呈棕黃色，形態(tài)不規(guī)則。在(×400)顯微鏡下計(jì)數(shù)視野中vWF陽性細(xì)胞的數(shù)目以此來反映腦梗死區(qū)中微血管密度。假手術(shù)組1、3、7d腦組織中微血管無或有少數(shù)散在分布，各組之間于第1d微血管數(shù)量無明顯差異，第3、7d模型組微血管數(shù)目有所增多，清腦益髓調(diào)督組和藥物組VWF抗體陽性細(xì)胞較密集且著色顯著，均強(qiáng)于模型組，尤以清腦益髓調(diào)督電針組明顯。模型組第3d與模型組第1、7d

8、比較，藥物組和清腦益髓調(diào)督組組內(nèi)比較第3、7d的變化陽性細(xì)胞分布密集均增加，以7d最為顯著。
　　2.2觀察腦微血管形態(tài)、測定微血管的直徑。模型組、清腦益髓調(diào)督組和藥物組大腦皮層微血管形狀均呈現(xiàn)迂曲不規(guī)則，與模型組比較清腦益髓調(diào)督組和藥物組血管迂曲、不規(guī)則程度較明顯，且隨著1、3、7d時(shí)間的變化，模型組、清腦益髓調(diào)督組和藥物組血管之間多靠攏形成連接，及微血管分支數(shù)目增多。第1d假手術(shù)組微血管直徑為7.12±0.27μm;模型組缺血

9、側(cè)微血管直徑為7.25±0.35μm;清腦益髓調(diào)督電針組缺血側(cè)微血管直徑為7.18±0.52μm;藥物組缺血側(cè)微血管直徑為7.33±0.30μm，第一天各組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著時(shí)間3、7d缺血側(cè)腦微血管的直徑逐漸變小，清腦益髓調(diào)督電針組、藥物組與模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;藥物組比清腦益髓調(diào)督組微血管直徑稍小，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:清腦益髓調(diào)督電針法能夠減少M(fèi)CAO大鼠腦組織中腦梗死面積，增加缺血區(qū)微血管的密度，減輕