Nanog-miR-200c通路在調(diào)控結(jié)腸癌EMT轉(zhuǎn)化中的作用及其臨床病理學(xué)意義.pdf

1、目的:
　　結(jié)腸癌在癌癥致死率中高居第三位，其代表著癌癥治療的巨大挑戰(zhàn)。EMT（上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化）在惡性腫瘤（例如乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌）的發(fā)生機(jī)制中廣泛存在。Nanog作為重要的干性轉(zhuǎn)錄因子，其與結(jié)腸癌干細(xì)胞的干性、自我更新能力的調(diào)控密切相關(guān)。同時(shí)，miRNAs也可以維持胚胎干細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的干性，在EMT可塑性的調(diào)控機(jī)制方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究旨在在結(jié)腸癌中探討Nanog與miR-200c重要的相關(guān)性，Nanog是如何調(diào)節(jié)mi

2、R-200c的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
　　方法及結(jié)果:
　　在臨床樣本水平，我們收集49例結(jié)腸癌患者的癌組織及其癌旁組織，通過實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)這些組織中miR-200c與miR-141的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，分析miR-200c與miR-141在結(jié)腸癌組織中的改變情況。聯(lián)合定量miR-200c/141的表達(dá)，分析其與患者臨床病理學(xué)特征之間的相關(guān)性、在患者術(shù)后1年預(yù)后方面的意義。結(jié)果顯示:結(jié)腸癌組織中miR-200c/141表達(dá)

3、水平較其相對(duì)應(yīng)的癌旁組織的表達(dá)量顯著降低。其中，miR-141表達(dá)量與腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或臨床早期的結(jié)腸癌患者其miR-141的表達(dá)量明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或臨床晚期患者的表達(dá)量。在腫瘤大小方面，miR-200c/141的表達(dá)量與腫瘤大小之間存在明顯的相關(guān)性（P＜0.05）。但在患者術(shù)后1年的生存率方面，miR-200c/141的表達(dá)量無明顯的預(yù)后意義（P＞0.05）。在細(xì)胞學(xué)水平，對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株

4、SW480和LS174T進(jìn)行Nanog過表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染，采用嘌呤霉素梯度篩選并建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株，通過Real-time PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)腸癌細(xì)胞株Nanog過表達(dá)轉(zhuǎn)染后對(duì)miR-200c的影響，并確立兩者相關(guān)性。對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和HCT116進(jìn)行siRNA/Nanog干擾，并通過Real-time PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)觀察對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株的Nanog表達(dá)情況的影響，以及后續(xù)對(duì)miR-20

5、0c的影響，結(jié)果顯示:進(jìn)行Nanog過表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染后，Real-time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，SW480和LS174T細(xì)胞中Nanog表達(dá)量顯著增加，miR-200e表達(dá)量顯著降低;Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)然后SW480和LS174T細(xì)胞中Nanog表達(dá)量顯著高于未轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染對(duì)照病毒的SW480和LS174T細(xì)胞。對(duì)Nanog干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:結(jié)腸癌細(xì)胞株中Nanog表達(dá)量顯著下降，而miR-200c的表達(dá)量呈

6、上升趨勢(shì)。Real-time PCR和Western blot聯(lián)合檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Nanog和miR-200c呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　在結(jié)腸癌組織樣本中表達(dá)下調(diào)的miR-200c/141與腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等相關(guān)。在細(xì)胞學(xué)水平，Nanog過表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染后SW480和LS174T中miR-200c表達(dá)量下降，Nanog干擾后HT29和HCT116細(xì)胞中miR-200c的表達(dá)量增加，因此，Nanog與