辣椒素對(duì)慢性應(yīng)激大鼠胃動(dòng)力的作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：通過(guò)研究不同劑量、不同作用時(shí)間的辣椒素（Capsaicin，Cap）對(duì)慢性應(yīng)激性(Chronic unpredictable mild stress，CUMS）大鼠胃酚紅排空率的影響，并檢測(cè)胃竇組織的及腦組織辣椒素受體（transient receptor potential vanilloid subtype1，TRPV1）、降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene related peptide，CGRP)、神經(jīng)降壓素

2、（Neurotensin，NT）的表達(dá)以及血清胃動(dòng)素（motilin，MTL）水平，探討Cap對(duì)慢性應(yīng)激大鼠胃動(dòng)力的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：SD大鼠120只，隨機(jī)抽取20只作為正常對(duì)照組（A組），SD大鼠100只建立CUMS模型。造模成功后，將其隨機(jī)分為空白對(duì)照組（B組）、溶劑對(duì)照組（C組）、Cap0.04mg/kg組（D組）、Cap0.4mg/kg組（E組）、Cap4mg/kg組（F組），每組各2

3、0只。為了探索不同時(shí)期Cap對(duì)CUMS大鼠胃動(dòng)力的影響，將實(shí)驗(yàn)分為I期、II期，I期為1周，II期為2周。按相應(yīng)時(shí)期，A組、B組、C組、D組、E組、F組隨機(jī)分為2個(gè)小組，即I期分為A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組（Cap1周），II期分為A2組、B2組、C2組、D2組、E2組、F2組（Cap2周），每組SD大鼠10只。
　　2.CUMS模型的建立：SD大鼠20只，隨機(jī)分成正常組、模型組各10只。正常組自由進(jìn)食進(jìn)水，連

4、續(xù)3w。模型組每天隨機(jī)安排一種刺激，包括:禁水、禁食、夾尾、水平搖晃、冰水游泳、熱水游泳、轉(zhuǎn)換晝夜節(jié)律、制動(dòng)、潮濕墊料，相鄰2d的刺激不重復(fù)，每種刺激重復(fù)2-3次，連續(xù)3w。
　　3.Cap制劑的配制：稱取Cap100mg（98.37％的Cap粉末101.66mg）、Cap10mg（98.37%的Cap粉末10.17mg）、Cap1mg（98.37%的Cap粉末1.02mg），分別加入含1ml吐溫80的生理鹽水99ml中混勻后，配

5、成濃度為1mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml的Cap制劑。對(duì)照溶劑：1ml吐溫80加入99ml生理鹽水中混勻配成溶劑。
　　4.Cap干預(yù)實(shí)驗(yàn)方法：造模完成后，每日給予各組大鼠不同溶液，A組無(wú)處理，B組蒸餾水灌胃，C組給予對(duì)照溶劑灌胃，D組Cap0.04mg/kg灌胃，E組Cap0.4mg/kg灌胃、F組Cap4mg/kg灌胃，給藥后所有大鼠常規(guī)喂養(yǎng)，各組大鼠按分期喂養(yǎng)后，所有大鼠禁食24h，于翌日晨給予濃度為50m

6、g/dL的酚紅溶液2ml/鼠灌胃，30min后麻醉處死大鼠。
　　5.檢測(cè)指標(biāo)：①收集胃內(nèi)容物，測(cè)定胃酚紅排空率。②心臟取血2ml，4℃離心后提取上清液，用Elisa法檢測(cè)血漿MTL水平。③顯微鏡下觀察大鼠胃粘膜損傷情況并進(jìn)行病理組織學(xué)評(píng)分。④取胃竇、腦組織后分別用Elisa和免疫組化方法檢測(cè)TRPV1、CGRP、NT的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、模型驗(yàn)證：
　?。?）動(dòng)物一般情況：正常組大鼠一般狀況良好，活動(dòng)靈

7、敏，進(jìn)食進(jìn)水正常，大小便正常；CUMS模型組大鼠精神狀態(tài)較差，消瘦萎靡，倦怠懶動(dòng)，毛發(fā)污濁，進(jìn)食進(jìn)水減少，大便干結(jié)量少。
　　（2）胃酚紅排空率：正常組與CUMS模型組胃酚紅排空率分別為80.36%±3.27%、65.83%±3.90%，CUMS模型組的胃酚紅排空率顯著低于正常組（P<0.05），造模成功。
　　2. Cap干預(yù)的結(jié)果：
　?。?）動(dòng)物一般情況：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組大鼠無(wú)死亡，其中A1組、A2組大鼠一般狀況良

8、好，活動(dòng)靈敏，進(jìn)食進(jìn)水正常，大小便正常；B1組、C1組、B2組、C2組大鼠精神狀態(tài)較差，消瘦萎靡，倦怠懶動(dòng)，毛發(fā)污濁，進(jìn)食進(jìn)水減少，大便干結(jié)量少。D1組、E1組、F1組大鼠一般精神狀態(tài)較差，消瘦萎靡，倦怠懶動(dòng)，毛發(fā)污濁，進(jìn)食進(jìn)水減少，大便干結(jié)量少。D2組大鼠一般狀況稍好，活動(dòng)稍遲緩，消瘦，進(jìn)食進(jìn)水正常，大小便正常。E2組大鼠一般狀況稍好，活動(dòng)稍遲緩，消瘦，進(jìn)食進(jìn)水正常，大小便正常。F2組一般狀況欠佳，活動(dòng)遲緩，消瘦，進(jìn)食進(jìn)水正常，大小便

9、正常。
　?。?）大鼠胃酚紅排空率：A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組分別為79.54%±2.98%、69.37%±4.21%、68.15%±3.67%、65.58%±7.50%、66.58%±5.31%、62.52%±5.34%；A2組、B2組、C2組、D2組、E2組、F2組分別為78.61%±4.04%、67.14%±3.44%、66.95%±3.93%、92.68%±2.31%、86.24%±2.75%、79.5

10、3%±2.24%。其中在 I期實(shí)驗(yàn)中，A1組胃酚紅排空率顯著高于該期其余各組（P<0.05）,其余各組相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在II期實(shí)驗(yàn)中，D2組、E2組、F2組胃酚紅排空率顯著高于B2組、C2組（P<0.05），且D2組胃酚紅排空率顯著高于E2組（P<0.05），E2組胃酚紅排空率顯著高于F2組（P<0.05）。在相同Cap劑量下D2組顯著高于D1組（P<0.05）,E2組顯著高于E1組（P<0.05）， F2組顯著

11、高于 F1組（P<0.05）。
　　（3）ELISA法檢測(cè)結(jié)果：①胃竇組織TRPV1表達(dá)結(jié)果：A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組分別為63.62±9.45pg/ml、269.38±11.07pg/ml、274.67±10.92pg/ml、138.16±12.10pg/ml、147.60±15.18pg/ml、150.62±11.95pg/ml，A2組、B2組、C2組、D2組、E2組、F2組分別為59.42±7.05pg

12、/ml、273.06±13.98pg/ml、271.57±11.59pg/ml、73.89±6.53pg/ml、99.50±5.94pg/ml、130.44±7.63pg/ml。其中在I期中，A1組顯著低于其余各組（P<0.05），D1組、E1組、F1組顯著低于B1組、C1組（P<0.05），而D1組、E1組、F1組之間相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在II期中，A2組顯著低于其余各組（P<0.05），D2組、E2組、F2組顯著

13、低于B2組、C2組（P<0.05），且D2組顯著低于E2組（P<0.05），E2組顯著低于F2組（P<0.05）。在相同Cap劑量下D1組顯著高于D2組（P<0.05）,E1組顯著高于E2組（P<0.05），F(xiàn)1組顯著高于F2組（P<0.05）。②下丘腦組織TRPV1表達(dá)結(jié)果：A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組分別為61.67±6.74pg/ml、284.06±6.88pg/ml、288.01±9.76pg/ml、154.4

14、8±8.53pg/ml、159.48±10.14pg/ml、151.77+13.25pg/ml，A2組、B2組、C2組、D2組、E2組、F2組分別為64.20±6.14pg/ml、284.50±5.45pg/ml、285.71±8.48pg/ml、78.52±6.31pg/ml、108.21±4.27pg/ml、132.26±4.19pg/ml。其中在I期，A1組顯著低于其余各組（P<0.05），D1組、E1組、F1組顯著低于B1組、C

15、1組（P<0.05），而 D1組、E1組、F1組之間相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在II期中，A2組顯著低于其余各組（P<0.05），D2組、E2組、F2組顯著低于B2組、C2組（P<0.05），且D2組顯著低于E2組（P<0.05），E2組顯著低于F2組（P<0.05）。在相同Cap劑量下D1組顯著高于D2組（P<0.05）,E1組顯著高于E2組（P<0.05），F(xiàn)1組顯著高于F2組（P<0.05）。③胃竇組織CGRP表達(dá)結(jié)

16、果：A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組分別為80.16±7.43pg/ml、218.66±10.24pg/ml、224.13±11.60pg/ml、110.37±8.90pg/ml、164.97±14.52pg/ml、197.67±10.04pg/ml，A2組、B2組、C2組、D2組、E2組、F2組分別為84.01±6.58pg/ml、220.79±9.71pg/ml、223.04±12.01pg/ml、110.79±8.7

17、4pg/ml、143.21±9.20pg/ml、182.93±9.31pg/ml。其中在I期，A1組顯著低于其余各組（P<0.05），D1組、E1組、F1組顯著低于B1組、C1組（P<0.05），且D1組顯著低于E1組（P<0.05），E1組顯著低于F1組（P<0.05）。在II期中，A2組顯著低于其余各組（P<0.05），D2組、E2組、F2組顯著低于B2組、C2組（P<0.05），且D2組顯著低于E2組（P<0.05），E2組顯著低

18、于F2組（P<0.05）。在相同Cap劑量下E1組顯著高于E2組（P<0.05），F(xiàn)1組顯著高于F2組（P<0.05）。④下丘腦組織CGRP表達(dá)結(jié)果：A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組分別為78.14±9.34pg/ml、219.64±9.28pg/ml、227.55±6.56pg/ml、109.88±7.29pg/ml、174.64±8.23pg/ml、206.78±6.81pg/ml，A2組、B2組、C2組、D2組、E2

19、組、F2組分別為82.69±7.22pg/ml、224.64±9.66pg/ml、232.55±4.97pg/ml、106.07±8.42pg/ml、156.79±5.39pg/ml、176.41±8.60pg/ml。在 I期中，A1組顯著低于其余各組（P<0.05），D1組、E1組、F1組顯著低于B1組、C1組（P<0.05），且D1組顯著低于E1組（P<0.05），E1組顯著低于F1組（P<0.05）。在II期中，A2組顯著低于其余

20、各組（P<0.05），D2組、E2組、F2組顯著低于B2組、C2組（P<0.05），且D2組顯著低于E2組（P<0.05），E2組顯著低于F2組（P<0.05）。在相同Cap劑量下E1組顯著高于 E2組（P<0.05），F(xiàn)1組顯著高于 F2組（P<0.05）。⑤胃竇組織NT表達(dá)結(jié)果：A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組分別為78.35±7.73pg/ml、247.40±8.25pg/ml、256.21±9.36pg/ml、10

21、8.72±10.18pg/ml、146.03±12.65pg/ml、170.56±8.08pg/ml，A2組、B2組、C2組、D2組、E2組、F2組分別為82.08±8.09pg/ml、243.80±6.44pg/ml、251.41±7.33pg/ml、107.93±8.43pg/ml、136.13±7.73pg/ml、174.40±7.04pg/ml。在 I期中，A1組顯著低于其余各組（P<0.05），D1組、E1組、F1組顯著低于B

22、1組、C1組（P<0.05），且D1組顯著低于E1組（P<0.05），E1組顯著低于F1組（P<0.05）。在II期中，A2組顯著低于其余各組（P<0.05），D2組、E2組、F2組顯著低于B2組、C2組（P<0.05），且D2組顯著低于E2組（P<0.05），E2組顯著低于F2組（P<0.05）。⑥下丘腦組織NT表達(dá)結(jié)果：A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組分別為91.59±7.79pg/ml、258.62±6.42pg/m

23、l、261.42±8.08pg/ml、107.29±4.73pg/ml、134.40±8.74pg/ml、183.06±6.11pg/ml，A2組、B2組、C2組、D2組、E2組、F2組分別為91.09±6.28pg/ml、262.89±6.37pg/ml、264.68±7.38pg/ml、111.38±2.94pg/ml、146.48±4.19pg/ml、190.67±3.75pg/ml。在 I期 A1組顯著低于其余各組（P<0.05

24、），D1組、E1組、F1組顯著低于B1組、C1組（P<0.05），且D1組顯著低于E1組（P<0.05），E1組顯著低于F1組（P<0.05）。在II期中A2組顯著低于其余各組（P<0.05），D2組、E2組、F2組顯著低于B2組、C2組（P<0.05），且D2組顯著低于E2組（P<0.05），E2組顯著低于F2組（P<0.05）。
　　（4）大鼠血漿MTL水平：A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組分別為169.44±8

25、.07pg/ml、71.73±8.54pg/ml、73.30±9.67pg/ml、115.46±9.96pg/ml、114.64±10.61pg/ml、105.27±9.23pg/ml， A2組、B2組、C2組、D2組、E2組、F2組分別為172.68±7.49pg/ml、75.48±10.03pg/ml、69.22±8.92pg/ml、152.93±5.66pg/ml、135.67±11.92pg/ml、130.34±12.84pg/

26、ml。在 I期實(shí)驗(yàn)中，A1組 MTL水平明顯高于其余各組（P<0.05），D1組、E1組、F1組均高于B1組、C1組（P<0.05），且D1組、E1組MTL水平明顯高于F1組（P<0.05），而D1組與E1組相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在II期實(shí)驗(yàn)中，A2組MTL水平明顯高于其余各組（P<0.05），D2組、E2組、F2組均高于B2組、C2組（P<0.05），且D2組MTL顯著高于E2組（P<0.05），E2與F2組相比較差

27、異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在相同Cap劑量下D1組顯著低于D2組（P<0.05）,E1組顯著低于E2組（P<0.05），F(xiàn)1組顯著低于F2組（P<0.05）。
　?。?）胃粘膜病理組織學(xué)檢查：胃粘膜病理組織損傷積分（Masuda標(biāo)準(zhǔn)方法）A1組、B1組、C1組、D1組、E1組、F1組分別為0.5±0.71、4.7±1.50、4.3±1.33、4.2±1.03、3.8±0.92、4.0±1.41，A2組、B2組、C2組、D2組

28、、E2組、F2組分別為0.3±0.48、4.1±1.45、4.5±1.35、2.1±0.74、2.5±0.85、2.4±0.84。在I期實(shí)驗(yàn)中，A1組顯著低于其余各組（P<0.05），其余各組之間相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在II期實(shí)驗(yàn)中，A2組顯著低于其余各組。D2組、E2組、F2組顯著低于B2、C2組（P<0.05），D2組、E2組、F2組之間相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。而在相同Cap劑量下，D1組顯著高于D

29、2組（P<0.05），E1組顯著高于E2組（P<0.05），F(xiàn)1組顯著高于F2組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.CUMS能成功建立大鼠胃動(dòng)力障礙模型，且能上調(diào)TRPV1的表達(dá)。
　　2.CUMS大鼠攝入0.04mg/(kg·d)-4mg/(kg·d) Cap1周對(duì)其胃動(dòng)力無(wú)促進(jìn)作用。
　　3.CUMS大鼠攝入0.04mg/(kg·d)-4mg/(kg·d) Cap2周對(duì)其胃動(dòng)力有明顯促進(jìn)作用，以0.04m