丹皮酚與代謝產(chǎn)物的抗炎抗氧化活性及其對(duì)MAPK炎性信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、本課題的目的是研究丹皮酚的體內(nèi)抗炎活性，進(jìn)一步研究丹皮酚及其主要代謝產(chǎn)物的抗炎活性及分子作用機(jī)制。
　　通過(guò)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹急性炎癥模型和 DSS誘導(dǎo)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型來(lái)評(píng)價(jià)丹皮酚對(duì)炎癥類(lèi)疾病的保護(hù)作用和治療作用。丹皮酚（M1）及其10個(gè)體內(nèi)主要代謝產(chǎn)物（M2~M11）的抗炎及抗氧化活性采用體外抗炎抗氧化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。用LPS刺激小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7釋放TNF-α、NO等炎癥介質(zhì)，并進(jìn)一步誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，以此實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/p>

2、評(píng)價(jià)丹皮酚及其主要代謝產(chǎn)物的體外抗炎作用及機(jī)制。實(shí)驗(yàn)采用Griess法檢測(cè)NO水平、ELISA法檢測(cè)TNF-α水平，同時(shí)采用MTT法評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性。Western blot法檢測(cè)iNOS蛋白、COX-2蛋白、IκB-α蛋白、p-ERK蛋白、p-JNK蛋白、p-p38蛋白及內(nèi)參蛋白β-actin水平，探討其在NF-κB或MAPKs炎癥信號(hào)通路上的作用機(jī)制。
　　口服給藥后，丹皮酚（20 mg/kg和40 mg/kg）能夠減少爪體積的腫

3、脹，并且減緩小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)展。與丹皮酚相比較，代謝產(chǎn)物 M3和 M11表現(xiàn)出更為顯著的DPPH自由基清除能力；除了代謝產(chǎn)物M8，其余代謝產(chǎn)物均具有羥基自由基清除活性，但是代謝產(chǎn)物M3和M11是最為有效的成分。代謝產(chǎn)物M3和M11可以有效地抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生炎癥介質(zhì) NO。Western blot結(jié)果表明，丹皮酚及其代謝產(chǎn)物M3和M11能夠下調(diào)iNOS和COX-2蛋白的高表達(dá)，并且相比于原型藥物丹皮酚，代謝產(chǎn)物

4、M3和 M11的作用更為顯著。進(jìn)一步研究表明，丹皮酚及其代謝產(chǎn)物M3和M11能夠阻斷MAPK/ERK1/2和p38蛋白的磷酸化，而對(duì)JNK蛋白的磷酸化沒(méi)有影響。
　　綜上，丹皮酚預(yù)處理可能作為一種針對(duì)包括結(jié)腸炎在內(nèi)的炎癥性疾病的有效治療方法；丹皮酚通過(guò)體內(nèi)代謝為其活性代謝產(chǎn)物發(fā)揮抗炎和抗氧化作用；丹皮酚可能是通過(guò)轉(zhuǎn)變?yōu)榇x產(chǎn)物2,5-二羥基-4-甲氧基苯乙酮和2,4,5-三羥基苯乙酮阻斷MAPK/ERK和MAPK/p38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通