人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)感染狀態(tài)下人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞功能的影響研究.pdf

1、目的：
　　1.探討感染（銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa，PA）對(duì)人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(A549)凋亡的影響及人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（ Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells，hUCMSCs）對(duì)此感染狀態(tài)下A549細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　方法：
　　1.建立人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(A549)體外感染模型，分為2組：(1)PA組：PA+A549；(2)對(duì)照組：

2、A549+PBS；分別觀(guān)察A549細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變、細(xì)胞存活率及細(xì)胞凋亡率。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變通過(guò)透射電鏡觀(guān)察；細(xì)胞存活率通過(guò)CCK-8新型細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒檢測(cè)；細(xì)胞凋亡率通過(guò)Annexin V-FITC/PI雙染色流式細(xì)胞檢測(cè)；
　　2.在人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(A549)體外感染模型的基礎(chǔ)上，觀(guān)察hUCMSCs對(duì)A549細(xì)胞的保護(hù)作用，分為2組：(1)PA組：PA+A549+PBS；(2)hUCMSCs組：PA+A549+hU

3、CMSCs；分別觀(guān)察A549細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變、細(xì)胞存活率、細(xì)胞凋亡率及SP-A的表達(dá)。A549細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變、細(xì)胞存活率及細(xì)胞凋亡率的檢測(cè)方法同前，SP-A的表達(dá)量通過(guò)Western Blot檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察顯示，PA組細(xì)胞受損明顯，胞質(zhì)出現(xiàn)空泡變性，染色質(zhì)高度凝集，可見(jiàn)凋亡小體；對(duì)照組A549細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞膜表面微絨毛豐富，核膜完整，核周間隙結(jié)構(gòu)正常，染色質(zhì)均一。細(xì)胞存活率結(jié)果顯示：PA組與

4、對(duì)照組相比，PA組細(xì)胞存活率明顯減少[(97.37±2.07)％與(70.35±2.89)%]，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示：PA組與對(duì)照組比較，PA組A549細(xì)胞凋亡率明顯增加[(2.55±0.11)%與(8.63%±0.16)%]，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察顯示，hUCMSCs組細(xì)胞包膜結(jié)構(gòu)完整，核膜完整，核仁明顯，核染色質(zhì)電子密度低，染色質(zhì)均一，未見(jiàn)凋亡

5、小體；PA組細(xì)胞受損明顯，胞質(zhì)出現(xiàn)空泡變性，染色質(zhì)高度凝集，可見(jiàn)凋亡小體。細(xì)胞存活率結(jié)果顯示：hUCMSCs組與 PA組相比， hUCMSCs組細(xì)胞存活率有所增加[(85.69±3.07)%與(70.35±2.89)%]，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P＜0.05）。細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示：hUCMSCs組與 PA組比較， PA組細(xì)胞凋亡率有所下降[(6.34±0.12)%與(8.63±0.16)%]，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）