MiR-506對結(jié)直腸癌中NR4A1的表達調(diào)控及其意義的研究.pdf

1、MicroRNAs（miRNAs）屬于一類內(nèi)源性的非編碼RNA，其長度一般為18~25個核苷酸。第一個miRNA lin4由Dr.Victor R.Ambros于1993年在線蟲中發(fā)現(xiàn)，并且經(jīng)證明與線蟲的發(fā)育有關(guān)。隨著越來越多的miRNA被發(fā)現(xiàn)，其功能也逐漸被發(fā)掘，并且組成了一個龐大的小分子調(diào)控RNA家族。研究表明，超過60％的哺乳動物基因表達受到miRNA的調(diào)控，它們主要涉及基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)，進而參與到各種各樣的細胞生理及病理過程

2、，例如細胞的增殖、凋亡和分化，以及癌癥的發(fā)生等。NR4A1（又稱Nur77、TR3、NGFIB）為NR4A孤兒核受體超家族的成員之一，它是一種“即早基因”，可被多種因素，如激素、生長因子、炎癥因子等快速誘導(dǎo)表達，并且在細胞的增殖、凋亡、血管重塑、炎癥反應(yīng)、糖脂代謝和腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。NR4A1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用較為復(fù)雜，它既可作為癌基因促進細胞增殖、抑制凋亡；又可作為抑癌基因表現(xiàn)出抑制細胞增殖、促進凋亡的作用。NR4A

3、1這種對腫瘤細胞生存的雙重調(diào)節(jié)作用主要與細胞類型、細胞微環(huán)境及NR4A1的亞細胞定位有關(guān)。研究證實NR4A1在結(jié)直腸癌組織中表達增加，并且可以促進結(jié)直腸癌細胞的增殖與遷移。我們利用在線生物數(shù)據(jù)庫TargetScan對NR4A1的3’-UTR（563bp）進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在NR4A13’-UTR第52-58bp上存在miR-506的作用位點。并且miR-506在人類、黑猩猩、恒河猴等高級靈長類物種以及齲齒類動物中高度保守，都可以和相應(yīng)物

4、種NR4A1基因的3’-UTR互補配對。提示miR-506對NR4A1可能具有調(diào)節(jié)作用，進而參與了NR4A1對結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的調(diào)控過程。因此，本研究旨在探討在結(jié)直腸癌中，miR-506對NR4A1的表達調(diào)控及其生物學(xué)意義，以期為結(jié)直腸癌提供新的治療靶點。
　　我們首先運用qRT-PCR和Western Blotting檢測結(jié)直腸癌組織和結(jié)直腸癌細胞中miR-506和NR4A1的表達水平，發(fā)現(xiàn)miR-506在結(jié)直腸癌組織和細胞中表

5、達降低，NR4A1的mRNA和蛋白表達水平升高。利用Spearman相關(guān)分析方法，顯示結(jié)直腸癌組織中NR4A1的mRNA表達與miR-506的水平呈明顯負相關(guān)。細胞實驗中我們發(fā)現(xiàn)miR-506mimic可以明顯降低NR4A1 mRNA和蛋白表達水平，miR-506 inhibitor對NR4A1 mRNA的水平?jīng)]有影響，但可以顯著增加NR4A1的蛋白表達。3’-UTR雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果表明，miR-506 mimic可以降低野生

6、型NR4A13’-UTR的活性，而對miR-506作用位點發(fā)生突變的3’-UTR活性沒有影響，提示miR-506是通過直接靶向NR4A1的3’-UTR而下調(diào)NR4A1的表達。為了進一步闡明miR-506以及NR4A1在結(jié)直腸癌中的生物學(xué)功能，我們最后分別采用MTT、流式細胞術(shù)及transwell遷移和侵襲實驗來檢測miR-506和NR4A1對結(jié)直腸癌細胞增殖、遷移和侵襲的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達miR-506或降低NR4A1的表達，均可抑制