整合素αvβ3抑制劑西侖吉肽在大鼠急性腦缺血中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討整合素αvβ3抑制劑西侖吉肽在急性腦缺血中對(duì)血腦屏障通透性、腦水腫、細(xì)胞凋亡的影響及其與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF變化的關(guān)系，并討論其作用的可能機(jī)制，為缺血性腦缺血后神經(jīng)保護(hù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組：
　　SPF級(jí)SD雄性大鼠94只，體質(zhì)量為230～300g，按照Longa改良線栓法建立大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)再灌注模型，并用 Longa法進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，將評(píng)分為1～3分的大鼠納入MCAO實(shí)

2、驗(yàn)組，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將MCAO實(shí)驗(yàn)組再分為治療組、對(duì)照組，從而對(duì)納入實(shí)驗(yàn)的大鼠共分成3組：(1)治療組，尾靜脈注射西侖吉肽200μg/kg(n=28)；（2）假手術(shù)組，不置入線栓，尾靜脈注射1ml生理鹽水(n=31)；(3)對(duì)照組，尾靜脈注射1ml生理鹽水(n=27)。各組均在梗塞后1h后治療，2h再灌注及24h后處死。
　　2.方法：
　?、偻ㄟ^(guò)干濕重法檢測(cè)梗塞側(cè)腦組織含水量；②提前2h從大鼠尾靜脈注射2％伊文思藍(lán)溶液（

3、EB）(4ml/kg)，采用酶分光光度計(jì)測(cè)定梗塞側(cè)腦組織EB含量，比較各組血腦通透性的差異；③通過(guò)TTC技術(shù)測(cè)量腦梗塞面積；④Western Blot法檢測(cè)VEGF、P-Flk、C-Caspase-3蛋白的表達(dá)變化；⑤免疫組織化學(xué)法觀察腦組織內(nèi)P-Flk的空間表達(dá)情況；⑥TUNEL法檢測(cè)腦組織內(nèi)神經(jīng)元凋亡情況。
　　3.結(jié)果：
　?、倌X組織含水量：與對(duì)照組比較，治療組、假手術(shù)組的腦組織含水量降低（p﹤0.05）；但治療組的腦

4、組織含水量仍高于假手術(shù)組（p﹤0.05）。
　?、谀X組織EB含量：與對(duì)照組比較，治療組、假手術(shù)組的腦組織EB含量降低（p﹤0.05）；但治療組的腦組織EB含量仍高于假手術(shù)組（p﹤0.05）。
　?、酃Ｈ娣e：與對(duì)照組比較，治療組梗塞面積均減少（p﹤0.05）。
　　④Cleaved-Caspase-3檢測(cè)結(jié)果：免疫印跡結(jié)果顯示治療組、假手術(shù)組的Cleaved-Caspase-3蛋白表達(dá)量低于對(duì)照組（ p﹤0.05）；治

5、療組的Cleaved-Caspase-3蛋白表達(dá)量仍高于假手術(shù)組（p﹤0.05）。
　?、軻EGF檢測(cè)結(jié)果：免疫印跡結(jié)果顯示治療組、假手術(shù)組的VEGF蛋白表達(dá)量低于對(duì)照組（p﹤0.05）；治療組的VEGF蛋白表達(dá)量仍高于假手術(shù)組（p﹤0.05）。
　?、轕-Flk檢測(cè)結(jié)果:免疫印跡結(jié)果顯示治療組、假手術(shù)組的P-Flk蛋白表達(dá)量低于對(duì)照組（p﹤0.05）；治療組的P-Flk蛋白表達(dá)量仍高于假手術(shù)組（p﹤0.05）。免疫組化結(jié)果

6、顯示： P-Flk陽(yáng)性表達(dá)主要見(jiàn)于治療組及對(duì)照組的血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管壁，假手術(shù)組血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管壁未見(jiàn)明顯陽(yáng)性表達(dá)。
　?、吣X組織原位細(xì)胞凋亡測(cè)定：治療組的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組減低（p﹤0.05）；治療組的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)仍高于假手術(shù)組（p﹤0.05）。
　　4.結(jié)論：
　?、僭谌毖缙冢o予西侖吉肽治療后，可以降低血腦屏障通透性，減輕腦水腫、降低細(xì)胞凋亡及梗塞面積。
　?、谠谌毖缙?，給予西侖吉肽