柴胡中皂苷類成分的藥代動力學及組織分布研究.pdf

1、選題依據(jù)：近年來研究表明柴胡具有保肝、解熱、抗炎等多種藥理活性。關(guān)于柴胡皂苷藥代動力學和體內(nèi)代謝過程的研究雖然很多，但是多數(shù)針對柴胡皂苷單個化合物，體現(xiàn)不出中醫(yī)理論的整體性，關(guān)于體內(nèi)組織分布的研究匱乏，僅發(fā)現(xiàn)柴胡皂苷d的研究，故本研究對柴胡藥代動力學及組織分布進行更加全面深入研究。
　　中藥煎煮是傳統(tǒng)用藥和臨床用藥的主要方式，隨著中藥材現(xiàn)代研究手段的增多，有越來越多的工藝選擇了醇提方式。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為藥材水煎能夠促進其在體內(nèi)的吸

2、收，最大限度發(fā)揮藥效，現(xiàn)代研究認為藥材醇提后能夠得到更多有效成分，利于藥效發(fā)揮。那么這兩種不同提取方式對柴胡的化學成分和體內(nèi)過程有什么影響呢，尚不清楚，故本研究比較了醇提和水煎后柴胡在體內(nèi)外成分種類和數(shù)量的差異，并對兩種提取方式進行柴胡藥代動力學研究。
　　中藥材除單味藥材制劑外，更多通過配伍后以方劑形式使用，柴胡有很多應用廣泛的方劑如逍遙散，小柴胡湯等，柴胡-白芍藥對是出自《太平惠民和劑局方》，臨床應用歷史悠久，與白芍配伍對柴胡

3、在體內(nèi)的影響尚不清楚，本文通過柴胡與白芍配伍前后水煎液中主要成分的藥代動力學和組織分布研究，對白芍對柴胡在體內(nèi)的影響進行初探。通過這一系列研究為柴胡臨床用藥和新藥研發(fā)提供基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　目的：首先，對柴胡中化學成分進行全面分析，并比較三種樣品（柴胡醇提物、柴胡水煎液、柴胡+白芍水煎液）中化學成分種類和數(shù)量差異；其次，基于代謝組學方法篩選柴胡藥代動力學指標成分，對指標成分進行定量分析，并比較三種樣品間含量差異；再次，對柴胡藥代動力

4、學及組織分布進行探究，并比較不同提取方法、配伍對柴胡藥代動力學及組織分布的影響。為臨床合理用藥及柴胡相關(guān)新藥研發(fā)提供科學依據(jù)。
　　方法：
　　1.建立柴胡中化學成分定性分析的UPLC-MS方法。色譜條件：BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm）；流動相為0.1％甲酸水（A）-乙腈（B）；梯度洗脫：0～30 min，10%～60%B；30～40 min，60%～90%B；40～45 min，90%B；體

5、積流量0.3 mL/min；柱溫35℃；質(zhì)譜條件：ESI源：+3.0 KV/-2.7 KV;Sheath Gas Pressure:35arb;Aux Gas Pressure:10arb;Capillary Temp:300℃;Heater Temp:300℃; Scan mode: Full MS( Resolution70000) and dd-MS2( Resolution17500, NCE25, Stepped NCE50%

6、);Scan range:m/z150~2000。
　　2.對柴胡醇提物給藥前后的大鼠血清進行UPLC-MS分析，結(jié)合代謝組學、PCA、OPLS-DA分析找出柴胡藥代動力學指標成分，色譜條件與質(zhì)譜條件同1。
　　3.建立柴胡中指標成分SSa、SSc、SSd、SSb1、SSb2的UPLC含量測定方法，并應用于柴胡醇提物、柴胡水煎液、柴胡+白芍水煎液。色譜柱：BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm）；流動相

7、：水（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～6 min，30%B；6～10 min，30～37%B；10～17 min，37%B；17～23 min，37%～90%B；23～25 min，90%～90%B；體積流量0.3 mL/min；柱溫35℃；PDA全波長掃描。
　　4.建立血清中指標成分的UPLC-MS含量測定方法，并應用于藥代動力學研究；同時對血清中其它原型成分進行半定量分析，便于全面了解柴胡在機體內(nèi)行為。選用雄性SD大鼠，隨機

8、分為3組，分別灌胃給予大鼠柴胡醇提物、柴胡水煎液、柴胡+白芍水煎液，分別于給藥前及給藥后0.083 h，0.25 h，0.5 h，0.75 h，1h，1.5 h，3 h，5 h，8 h，12 h經(jīng)眼眶取血約0.5 mL，測定血藥濃度，繪制藥-時曲線，計算藥動學參數(shù)。
　　5.建立組織中藥代指標成分SSa、SSc、SSd、SSb1、SSb2 UPLC-MS含量測定方法，并應用于組織分布研究。選用SD大鼠，隨機分為3組，分別灌胃給予大

9、鼠柴胡醇提物、柴胡+白芍水煎液、柴胡水煎液，給藥后0.25 h、0.5 h、0.75 h、3 h、5h處死取心、肝、脾、肺、腎組織，樣品經(jīng)預處理后，采用上述方法測定組織中各皂苷類成分的含量，完成組織分布研究。
　　結(jié)果：
　　1.對柴胡的主要化學成分進行UPLC-MS分析，總結(jié)皂苷類成分裂解規(guī)律，檢測鑒定出柴胡皂苷類成分23種。比較三種樣品中成分，結(jié)果顯示柴胡醇提物中成分種類和數(shù)量多于水煎液，但是SSb1和SSb2水煎液中略

10、多；與白芍配伍前后無明顯差異。
　　2. UPLC-MS分析灌胃給予柴胡醇提物前后血清，通過代謝組學方法篩選出5種VIP值較大的藥材原型成分：SSa、SSc、SSd、SSb1、SSb2，將其作為柴胡藥代動力學指標成分。
　　3.建立了5種皂苷類指標成分的UPLC含量測定方法，測定了柴胡不同提取方法下的樣品（水煎液和醇提物）中皂苷類成分的含量，結(jié)果表明：醇提物中的SSa、SSd的含量明顯高于水煎液中，水煎液中的SSb1和SSb

11、2含量明顯升高。本方法穩(wěn)定，快速，方便，便于推廣，為柴胡的質(zhì)量控制提供了基礎(chǔ)。
　　4.在藥代動力學實驗中，得到了各成分血藥濃度、藥-時曲線圖、藥動學參數(shù)，結(jié)果顯示各成分的Tmax在0.5 h左右，t1/2在1.5 h左右，Vz/F遠大于0.67 L/kg（大鼠體液體積），表明柴胡皂苷類成分具有吸收快、消除快、分布廣的特點；柴胡水煎液與柴胡醇提物組相比較，各成分的消除變緩；與白芍配伍后，各成分的吸收變緩，消除加快。
　　5.

12、組織分布實驗中，本研究測定的5種柴胡皂苷類成分組織分布存在一定相似性。灌胃給予大鼠柴胡醇提物后，SSa、SSd、SSc、SSb1、SSb2在肺、肝中的分布量較大，表明與肺、肝組織的親和力較強。灌胃給予柴胡水煎液后，SSa、SSc、SSb1、SSb2與肺、心的親和力較強，尤其是肺組織，表明其更傾向于向肺組織分布；柴胡水煎液組與醇提物比較，向肺組織的分布趨勢相同，對于其它組織，水煎液組傾向于心組織，醇提組傾向于肝組織，可能由兩種提取物中共存

13、成分不同導致；灌胃給予大鼠柴胡+白芍水煎液后，各成分在腎組織分布量明顯增大，并且含量高于肺組織，表明與白芍配伍增加了柴胡皂苷腎組織分布，這一現(xiàn)象可能與白芍的收斂作用有關(guān)。
　　結(jié)論：本研究通過UPLC-MS分析鑒定了柴胡中23種化學成分，結(jié)合代謝組學篩選出柴胡藥代指標成分5種，并對其進行了定量分析。本研究中建立的UPLC-MS方法靈敏、快速、可靠，并成功的用于柴胡藥代動力學及組織分布研究，獲得了柴胡皂苷類成分的藥動學參數(shù)，揭示了各