重組人胸腺素α原與細胞增殖的關系及其作為泌尿系統腫瘤標記物的研究.pdf

1、胸腺素α原是一種在體內廣泛表達的小分子量強酸性蛋白質，進化上高度保守，分布極其廣泛，淋巴組織及非淋巴組織均可找到，其相對分子質量為12.5k，基因定位于第2號染色體上。它除了具有促進機體免疫功能外，另一個重要功能是提高細胞的增殖能力，是細胞生長和存活不可缺少的；缺乏ProTα的細胞不能分裂。由于ProTα與細胞增殖相關，而腫瘤細胞具有強烈的增殖活性，因而ProTα在腫瘤進展中的作用成為研究焦點。ProTα參與腫瘤發(fā)生、細胞凋亡及轉錄調節(jié)

2、。目前的研究主要集中于ProTα基因的調節(jié)機制及其在腫瘤診斷和治療中的價值。
　　 由于ProTα無二級結構，免疫原性差，很難制備出對它的單克隆抗體，本研究分別采用ProTα與小分子載體蛋白KLH偶聯的方法，和運用常規(guī)基因工程手段獲得GST-ProTα融合蛋白，增強ProTα的免疫原性，制備出較高效價的大鼠抗ProTα的多克隆抗體、小鼠抗ProTα的多克隆抗體和兔抗ProTα的多克隆抗體，之后采用細胞熒光免疫組化、石蠟切片免疫組

3、化、斑點雜交、Western-Blot等方法，將這些抗體應用于正常增殖的細胞、腫瘤細胞、組織蛋白、人體尿液、病理切片等的免疫親和反應檢測，初步探討ProTα與細胞增殖的關系和在腫瘤組織中的表達，以及ProTα作為泌尿系統腫瘤標記物的可行性。
　　 結果顯示，制備出的多克隆抗體效價較高，與抗原蛋白能產生較強的特異性結合。通過對處于分裂狀態(tài)下的非腫瘤細胞(包括小鼠淋巴結細胞，腎小管細胞)的檢測發(fā)現，這些分裂的細胞均被檢測有ProTα

4、高表達，并且集中在細胞核內。以標準品ProTα做陽性對照對膀胱腫瘤、腎腫瘤和前列腺癌患者尿液檢測，均能夠特異性檢測到其中的ProTα，腫瘤病人尿液的檢出率為100％，并且發(fā)現晚期病人樣品反應強度比早期患者明顯增強，術前病人樣品明顯比術后病人樣品反應強。泌尿系統炎癥等疾病尿液檢出率為53.8%，正常人只有9%，且顯示斑點明顯微弱，檢測下限為1ng/μL。作為一種篩選手段，敏感性和陰性預測比特異性更重要，也就是說減少漏診率，因此，本實驗對于