鹽芥冷響應(yīng)miRNA表達(dá)模式分析及tsA-miR396功能初探.pdf

1、microRNA(miRNA)是一類不編碼蛋白質(zhì)、長度約為20-24 nt的內(nèi)源單鏈RNA分子，是廣泛存在于動物、植物和微生物等多種有機體中的非蛋白質(zhì)的基因表達(dá)調(diào)控因子。植物miRNA的調(diào)控作用不僅涉及植物組織器官的生長發(fā)育、激素調(diào)節(jié)、免疫反應(yīng)等生物學(xué)過程，并且參與植物對多種生物和非生物脅迫（如營養(yǎng)脅迫、干旱脅迫、鹽脅迫、低溫脅迫等）的響應(yīng)。
　　鹽芥（Thellungiella salsuginea）是與模式植物擬南芥（Arab

2、idopsis thaliana）親緣關(guān)系非常近的一種鹽生模式植物。鹽芥在受到冷脅迫后體內(nèi)缺乏內(nèi)生冰核因而具有抗寒性，未經(jīng)冷馴化的鹽芥可以在-13℃的條件下生存，冷馴化后的鹽芥能夠在-18.5℃的條件下生存。本研究分析了鹽芥受到冷脅迫后體內(nèi)部分保守的miRNA表達(dá)量變化情況，并對tsa-miR396的功能進(jìn)行初探。
　　(1)利用實時熒光定量PCR方法檢測的結(jié)果表明，鹽芥受到4℃冷脅迫處理0、2、5、8、12、24小時后，9個mi

3、RNA家族(tsa-MIR160、tsa-MIR167、tsa-MIR169、tsa-MIR171、tsa-MIR172、tsa-MIR319、tsa-MIR396、tsa-MIR403、tsa-MIR408)成員的表達(dá)量均存在著不同程度的變化。tsa-miR160abc、tsa-miR171a和tsa-miR171 bcde在受到冷脅迫后表達(dá)趨勢是在5h時下調(diào)，8h時上調(diào)，12至24 h時下調(diào);tsa-miR167abc、tsa-mi

4、R169a、tsa-miR169bc、tsa-miR169deg、tsa-miR172abc、tsa-miR319a、tsa-miR319b和tsa-miR408的表達(dá)量在鹽芥受到冷脅迫處理后下降;tsa-miR169f的表達(dá)量在鹽芥受到冷脅迫處理8h后上升;tsa-miR396和tsa-miR403的表達(dá)量在鹽芥受到冷脅迫后首先分別在2h及5h時上升，接著在8h時下降。
　　(2)由于miRNA的生物學(xué)功能主要取決于其靶基因的功

5、能，因此我們利用在線靶基因預(yù)測軟件psRNATarget預(yù)測冷脅迫后響應(yīng)最為迅速的tsa-miR396的靶基因，結(jié)果得到25個靶基因。然后利用5' RACE(rapid amplification of cDNA ends)方法驗證tsa-miR396的靶基因Thhalv10024915m，發(fā)現(xiàn)tsa-miR396對于靶基因Thhalv10024915m的切割位點分別在tsa-miR3965'末端的第8個和第9個核苷酸之間、第10個和第