1,25-二羥維生素D3誘導人胃癌細胞線粒體途徑凋亡的實驗研究.pdf

1、金萍l ，2 5 ．二羥維生素D 3 誘導人胃癌細胞線粒體途徑凋亡的實驗研究1 ，2 5 - - - 羥維生素D 3 誘導人胃癌細胞線粒體途徑凋亡的實驗研究中文摘要目的觀察1 ，2 5 - 二羥維生素D 3 [ 1 ，2 5 ．d i h y d r o x y v i t a m i nD 3 ，1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 】對人胃癌細胞的影響，探討1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 是否抑制胃癌細胞的增殖并誘

2、導其凋亡，并進一步探討1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 是否通過p 5 3 介導的線粒體途徑誘導細胞凋亡從而發(fā)揮抗腫瘤作用。方法1 ．噻唑藍還原法( M T T ) 檢測不同時間干預下，不同濃度1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 對M G C - 8 0 3 細胞增殖活性的影響。2 ．A n n e x i nV - F I T C ／P I 染色后，流式細胞術(shù)( F C M ) 檢測不同濃度1 , 2 5 ( O H

3、 ) 2 D 3 作用后，M G C ．8 0 3 細胞凋亡率的變化。3 ．熒光探針羅丹明一1 2 3 檢測不同濃度1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 作用后，M G C ．8 0 3 細胞線粒體膜電位的變化。4 ．熒光探針D C F H —D A 檢測不同濃度1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 作用后，M G C ．8 0 3 細胞內(nèi)R O S 生成的變化。5 ．R T - P C R 法檢測不同濃度1 , 2 5 (

4、 O H ) 2 D 3 干預后，M G C - 8 0 3 細胞內(nèi)p 5 3 m R N A 的變化。6 ．分光光度法檢測不同濃度1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 干預后，M G C ．8 0 3 細胞內(nèi)C a s p a s e ．3 、9 活性的變化。娃甲 ：日木1 ．M T T 結(jié)果顯示：1 0 培m o l ／L 濃度組作用細胞2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 、9 6 h 后，細胞存活率依次為( 9 6 ．3

5、 7 士5 ．6 8 ) ％、( 8 9 ．2 9 土2 ．7 2 ) ％、( 7 5 ．7 6 士3 ．4 8 ) ％、( 7 6 ．0 3 + 1 ．2 2 ) ％；1 0 。7 m o l ／L 濃度組作用細胞2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 、9 6 h 后，細胞存活率依次為( 9 2 ．0 9 士7 ．3 9 ) ％、( 8 5 ．2 6 + 4 ．6 9 ) ％、( 6 5 ．0 5 士2 ．4 1 ) ％、( 6 3

6、 ．6 8 士1 ．2 5 ) ％；1 0 擊m o l ／L 濃度組作用細胞2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 、9 6 h 后，細胞存活率依次為( 8 2 ．3 4 士4 ．1 ) ％、( 7 3 ．8 6 士6 ．4 8 ) ％、( 5 3 ．5 6 士1 ．9 4 ) ％、( 4 9 ．5 8 士1 ．2 4 ) ％；1 0 ‘5 m o l ／L 濃度組作用細胞2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 、9 6 h 后，細胞

7、存活率依次為( 7 1 ．9 9 - 3 ：6 ．7 1 ) ％、( 5 9 ．4 3 + 3 ．5 7 ) ％、( 4 0 ．6 2 士1 ．7 3 ) ％、( 3 7 ．0 6 士1 ．8 4 ) ％。正常對照組與溶媒組的細胞存活率在各時間段均無統(tǒng)計學意義∽O ．0 5 ) ；不同濃度1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 作用于人胃癌細胞M G C ．8 0 3 相同時間后，除1 0 。8 m o l ／L 濃度組作用金萍 1

8、 ，2 5 ．二羥維生素D 3 誘導人胃癌細胞線粒體途徑凋亡的實驗研究 36 ．1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 對M G C - 8 0 3 細胞處理7 2 h 后，C a s p a s e ．3 檢測結(jié)果顯示：溶媒組和1 0 ～m o l ／L ，1 0 ～m o l ／L ， 1 0 ～m o l ／L ， 1 0 。5 m o l ／L 濃度組的p N A 濃度分別為( 1 9 ．0 8 士2 ．1 ) 、( 1 8

9、 ．2 8 士1 ．3 3 ) 、( 2 8 ．6 2 士2 ．1 6 ) 、( 3 1 ．9 6 士2 ．1 7 ) 、( 4 0 ．2 3 士3 ．0 6 ) l x m o l ／L ；C a s p a s e - 9 檢測結(jié)果顯示：溶媒組和1 0 一m o l ／L ， 1 0 ～m o l ／L ， 1 0 ～m o l ／L ， 1 0 。5 m o l ／L 濃度組的p N A 濃度分別為( 2 2 ．8 8 士2 ．5

10、 3 ) 、( 2 5 ．7 5 土3 ．5 3 ) 、( 3 2 ．5 3 士1 ．3 3 ) 、( 4 9 ．0 8 土2 ．2 7 ) 、( 7 9 ．6 5 土4 ．2 3 ) l x m o l ／L 。1 0 ‘8 m o l ／L 濃度組C a s p a s e ．3 、9 活性與溶媒組比較，差異無統(tǒng)計學意義( 胗O ．0 5 ) ；1 0 ～m o l ／L ，1 0 ～m o l ／L ，1 0 。5 m o l ／

11、L 濃度組較溶媒組相比，均有顯著性差異( P < O ．0 1 ) 。實驗結(jié)果表明：1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3能誘導C a s p a s e 一3 、9 的活化，且呈劑量依賴性。結(jié)論1 , 2 5 ( O H ) 2 D 3 可誘導人胃癌細胞M G C ．8 0 3 的凋亡，其作用機制可能與p 5 3 介導的線粒體途徑依賴的細胞凋亡機制有關(guān)。關(guān)鍵詞1 ，2 5 ．二羥基維生素D 3 ；M G C ．8 0 3 ；