1,25-二羥維生素D3對人胃粘膜上皮細胞惡性轉化過程的影響.pdf

1、研究背景與目的：隨著社會的進步和經(jīng)濟的快速發(fā)展，城市化進程的加速和化境的污染，人們生活方式及飲食結構的發(fā)生了明顯改變，同時疾病譜也發(fā)生了變化。盡管醫(yī)學的進步，惡性腫瘤的死亡率呈現(xiàn)逐年下降趨勢,但各類惡性腫瘤的發(fā)病率不斷上升，特別是消化系統(tǒng)惡性腫瘤，占有較大比例，如胃癌、肝癌、胰腺癌等。是威脅人類生命的重要因素之一。據(jù)統(tǒng)計,每四個死亡病例中就有一個是死于惡性腫瘤[1]。對于腫瘤的研究，發(fā)病機制是醫(yī)學研究的一個熱點。MNNG是由人工合成的亞

2、硝基類化合物,替代自然界中的亞硝酰胺類化合物,用來研究在腫瘤形成中的作用。它與胃液中亞硝基物的誘變機制相似。GES-1細胞來源于人,雖然具有永生性,但仍保留了部分正常胃粘膜的特性,如正常的骨架系統(tǒng)、粘蛋白分泌功能、停泊依賴性和裸鼠中非致瘤性等。在MNNG作用下GES-1發(fā)生了一些表型改變,如染色體畸變增多、骨架微絲異常、克隆形成率增加,并獲得軟瓊脂集落生成能力[2]。研究已經(jīng)證實，經(jīng)MNNG誘導后大部分細胞會逐漸死亡，一周左右時間,GE

3、S-1細胞將發(fā)生如染色體數(shù)目、結構異常,基因重排，幼鼠接種后可致瘤[3]。流行病學證據(jù)表明，經(jīng)常暴露于亞硝胺類飲食的環(huán)境中的人們，與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關。亞硝胺類物質對人體的致癌性已成為一個全球性健康問題[4、5]。1，25-二羥維生素D3是維生素(Vit)D3經(jīng)肝、腎代謝后的主要活性形式,有著重要的生物活性,其生物效應是由VitD受體(VDR)介導的。近年來隨著國內(nèi)外學者對1，25-二羥維生素D3的研究不斷深入,發(fā)現(xiàn)除了維持體內(nèi)鈣環(huán)

4、境相對穩(wěn)定外,還具有調(diào)節(jié)免疫、抑制腫瘤細胞增殖等十分廣泛的作用，1，25-二羥維生素D3具有一定的防癌及抗癌活性,對乳腺癌、肺癌等具有較好的治療作用[6-7]。
　　本實驗是通過將體外培養(yǎng)的人胃粘膜上皮細胞系（GES-1），經(jīng)化學致癌劑N-甲基-N-硝基-N-亞硝基胍（MNNG)誘導使細胞惡性轉化，研究1，25-二羥維生素D3(骨化三醇)在經(jīng)MNNG惡性轉化的過程中對細胞生長、凋亡及Shh、Gli1基因表達的產(chǎn)生的影響，以便為癌變

5、的機制和預防提供理論依據(jù)。
　　方法
　　1.分為實驗組、對照組和GES-1組。MNNG誘導的GES-1細胞（對照組），誘導后給予不同濃度（10-6、10-7、10-8、10-9mmol/L）1，25-二羥維生素D3進行干預（實驗組）。
　　2.采取四甲基固氮唑鹽（MTT）檢測實驗組和對照組細胞增殖并確定實驗組最佳藥物濃度。
　　3.流式細胞儀（flowcytometry）檢測各組細胞的凋亡率。
　　4.R

6、T-PCR檢測各組細胞Shh、Gli1mRNA基因的表達。
　　結果
　　MTT法顯示，對照組細胞出現(xiàn)大量死亡，實驗組給予10-6、10-7、10-8、10-9mol/L的1，25-二羥維生素D3干預后存活細胞較對照組增多（P＜0.05）。取最佳藥物作用濃度10-6mol/L為實驗組、對照組及GES-1細胞組，F(xiàn)CM測各組細胞7d的凋亡率。分別為實驗組(44.73±2.04)％、對照組(85.23±2.08)%、GES-1細

7、胞組(4.9±0.91)%，與對照組相比實驗組細胞凋亡明顯減少（P＜0.05）。RT-PCR顯示ShhmRNA實驗組（0.6747±0.0116）、對照組(0.6616±0.0095)均表達（P>0.05），Gli1mRNA實驗組（0.3382±0.0150）表達低于對照組（0.5328±0.0115）(p<0.05)。
　　結論
　　1，25-二羥維生素D3有阻止GES-1細胞惡性轉化的作用，從而可達到延緩或阻止細胞惡變的