脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞CD73陽(yáng)性亞群體外分化能力評(píng)價(jià).pdf

1、背景：
　　缺血性心臟病發(fā)病率和死亡率極高，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。心肌一旦梗死，心肌細(xì)胞數(shù)量迅速減少，疤痕組織替代正常組織結(jié)構(gòu)，心室發(fā)生退行性重塑，心肌泵血功能下降，導(dǎo)致心力衰竭。近幾年干細(xì)胞研究逐步深入，細(xì)胞移植被認(rèn)為是一種極具臨床應(yīng)用前景的治療缺血性心臟病的再生醫(yī)學(xué)療法。在所有可供心肌移植的種子細(xì)胞中，脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells，ADMSCs)具

2、有分化為心肌細(xì)胞的潛能、易于獲得、細(xì)胞存儲(chǔ)量大以及倫理問(wèn)題少，有望成為心肌修復(fù)最理想的干細(xì)胞之一。但是，ADMSCs是非均質(zhì)的細(xì)胞群，不同亞群生物學(xué)特性的差異在一定程度影響ADMSCs的應(yīng)用效果。因此，研究ADMSCs不同亞群的生物學(xué)特性、篩選向心肌分化的優(yōu)勢(shì)亞群，對(duì)加大研究針對(duì)性和提高臨床療效具有十分重要的意義。
　　目的：
　　以CD73為分選標(biāo)準(zhǔn)，分離、純化CD73陽(yáng)性和CD73陰性的ADMSCs，研究?jī)蓚€(gè)亞群的生物學(xué)

3、特性和向心肌分化、脂肪細(xì)胞分化、骨細(xì)胞分化潛能的差異，篩選出心肌分化優(yōu)勢(shì)亞群，為進(jìn)一步開(kāi)展細(xì)胞治療心肌疾患提供實(shí)驗(yàn)參考。
　　方法：
　　1.流式細(xì)胞儀分選CD73+/CD73-ADMSCs亞群，HE染色觀測(cè)其形態(tài)，免疫熒光化學(xué)法檢測(cè)亞群的間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記CD73、CD90和CD105的表達(dá)。
　　2.5-aza誘導(dǎo)CD73+/CD73-ADMSCs亞群，細(xì)胞免疫熒光化學(xué)法檢測(cè)心肌特異性蛋白心肌肌鈣蛋白c-TnT，

4、Real-time PCR檢測(cè)c-TnT、Gata-4基因水平變化。
　　3.成脂肪誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)CD73+/CD73-ADMSCs亞群，油紅O檢測(cè)成脂肪細(xì)胞分化情況，分光光度計(jì)檢測(cè)評(píng)價(jià)亞群的成脂肪細(xì)胞分化能力。
　　4.成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)CD73+/CD73-ADMSCs亞群，茜素紅檢測(cè)成骨細(xì)胞分化情況，Real-time PCR檢測(cè)骨細(xì)胞OST和RUNX2基因水平變化。
　　結(jié)果：
　　1.流式細(xì)胞儀分選出CD73陽(yáng)

5、性和CD73陰性的ADMSCs，CD73-細(xì)胞以寬大扁平或方形細(xì)胞為主，表達(dá)CD105和CD90、不表達(dá)CD73;而CD73+ADMSCs主要是小細(xì)胞，形態(tài)特點(diǎn)呈細(xì)長(zhǎng)形、三角形、星狀或紡錘狀，表達(dá)CD90、CD105和CD73。
　　2.成心肌誘導(dǎo)后，CD73+ADMSCs心肌特異性c-TnT表達(dá)率45.6％、CD73-亞群5.3％，基因水平上CD73+亞群也較陰性亞群高表達(dá)c-TnT、Gata-4(P＜0.01)。
　　3

6、.成脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)后，CD73+ADMSCs與CD73-亞群油紅O染色均顯示陽(yáng)性，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　4.成骨細(xì)胞誘導(dǎo)后，CD73+ADMSCs與CD73-亞群茜素紅染色均顯示陽(yáng)性，表達(dá)骨細(xì)胞特異性O(shè)ST和RUNX2基因，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.CD73+ADMSCs形態(tài)以小細(xì)胞為主，表達(dá)CD90、CD105和CD73;而CD73-細(xì)胞主多為大細(xì)胞，表達(dá)CD105和CD