不同類型紅斑狼瘡患者血清中細胞因子的表達模式及意義.pdf

1、目的：LE（lupus erythematous，紅斑狼瘡）是一種典型的自身免疫性疾病，其中70-85％的患者具有皮膚癥狀。根據(jù)臨床表現(xiàn)（特別是皮膚表現(xiàn)）和實驗室檢查指標，分為SLE（systemic lupus erythematous，系統(tǒng)性紅斑狼瘡）和CLE(cutaneous lupuserythematosus，皮膚型紅斑狼瘡)。SLE免疫異常表型十分復雜，但不可否認，各種因素導致的多種免疫細胞免疫調(diào)控異常均可共同誘導自身免疫

2、性炎癥反應的形成，并成為導致器官損害的基礎。CLE發(fā)病同樣受多種致病因素影響，目前認為紫外線、角質(zhì)形成細胞凋亡、B細胞高反應、T細胞及樹突狀細胞活化及其相互作用構成CLE發(fā)病的主要機制，這些免疫細胞通過分泌多種細胞因子、自身抗體等直接或間接作用于靶組織并最終導致?lián)p傷。細胞因子是SLE和CLE中免疫細胞介導炎癥的重要介質(zhì)，參與了免疫過程各個環(huán)節(jié)，是免疫細胞發(fā)揮功能的重要效應物質(zhì)，在炎癥形成過程中占有十分重要的地位，不同類型的LE可能具有不

3、同的細胞因子參與。除B細胞、T細胞及中性粒細胞外，Mo/Mφ(monocytes/macrophages，單核-巨噬細胞)也是多種細胞因子的重要來源，近年來研究發(fā)現(xiàn)Mo/Mφ活化與LE發(fā)病密切相關，但Mo/Mφ在LE中的病理機制仍不清楚。為了進一步明確何種免疫因素在紅斑狼瘡的發(fā)病過程中起主導作用以及不同類型的紅斑狼瘡的免疫狀態(tài)有何區(qū)別，探討紅斑狼瘡的發(fā)病機制，尋找診斷與治療的靶點，需要對不同類型紅斑狼瘡體內(nèi)細胞因子表達模式進行評估并分析

4、致病因子與臨床的關聯(lián)性。
　　方法：我們的研究選取了20個來源于B淋巴細胞、T淋巴細胞以及Mo/Mψ的細胞因子，共納入96例患者(15例DLE，34例SCLE，47例SLE)，24例正常獻血員為研究對象，采用回顧性方法收集臨床資料。利用蛋白質(zhì)芯片技術半定量測定血清中相關的細胞因子，并采用ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，酶聯(lián)免疫法)對顯著升高的有意義因子進行定量驗證，同時通過蛋白質(zhì)相互

5、作用數(shù)據(jù)庫分析細胞因子之間的相互作用，采用SPSS17.0比較上述因子在血清中的表達水平在四組間的差異，分析有意義因子與常規(guī)臨床檢測指標的關聯(lián)性。
　　結果:1.蛋白質(zhì)芯片與ELISA兩種檢測方法所得檢測值具有極顯著相關性:IL18(R=0.702,p=0.000); MIF(R=0.522,p=0.000); MIP1α(macrophage inflammatoryprotein-1α，巨噬細胞炎癥因子1α)(R=0.824，

6、p=0.000)。
　　2.不同臨床類型的紅斑狼瘡具有不同的細胞因子表達模式:與正常對照相比，紅斑狼瘡患者血清中部分細胞因子顯著升高，不同臨床類型的紅斑狼瘡具有不同的細胞因子表達模式，分別為:DLE患者血清中IL-18(p=0.005)，MIF(p=0.000)，IL-17(p=0.000)表達水平較正常對照顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義;SCLE患者血清中IL-6(p=0.004)，IL-10(p=0.000),IL-18(p=0

7、.000),MIF(p=0.000), IL-17(p=0.000), IL-23p19(p=0.001),TNF-a(p=0.006)表達水平較正常對照顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義;SLE患者血清中IL-6(p=0.006), IL-10(p=0.000), IL-18(p=0.000), IL-17(p=0.000), TNFα(p=0.006),MIF(p=0.000), MIP-1α(p=0.000), IL-23p19(0.0

8、00), IFN-γ(p=0.003), MDC(p=0.008),IFN-α(p=0.020)表達水平較正常對照顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　3.不同類型紅斑狼瘡其炎癥因子水平有差異:通過分析疾病組中較正常對照顯著升高的因子發(fā)現(xiàn)IL-6(p=0.047)、IL-18(p=0.002)、MIF(p=0.002)、MIP-1α(p=0.026)在DLE、SCLE、SLE三組間表達差異具有統(tǒng)計學意義。
　　4.IL-17在

9、各型LE中均顯著高表達，其中SLE與SCLE中IL-17表達差異無統(tǒng)計學意義，但均顯著高于DLE，表明IL-17不同程度地參與了不同類型LE炎癥形成，其表達水平在DLE與SCLE中差異顯著，我們推測IL-17可能成為皮膚型紅斑狼瘡的分型指標，Th17細胞可能對DLE向SLE的轉(zhuǎn)化產(chǎn)生促進作用。
　　5.ELISA方法進一步證實Mo/Mφ相關細胞因子表達存在差別:通過ELISA實驗對發(fā)現(xiàn): MIF(p=0.001)、IL18(p=0

10、.005)、MIP1-a(p=0.005)在DLE、SCLE、SLE組間差異具有統(tǒng)計學意義，表現(xiàn)為SLE組細胞因子表達具水平較SCLE及DLE更高。其中，DLE與SCLE相比較， MIF(p=0.811)、MIP1-a(p=0.991)差異無統(tǒng)計學意義。
　　炎癥因子表達與臨床相關性分析:IL-18及MIF表達水平在經(jīng)激素治療大于3個月的SLE患者血清中均明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意（P＜0.001）;SLE患者24h尿蛋白量越高，

11、其血清中IL-18的含量越高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）;患者SLEDAI（systemic lupus erythematosus disease activity index，系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動度評分）及ANA滴度越高，其血清中IL-18的水平越高，差異具有統(tǒng)計學意義(P≤0.05);IL-18血清水平與C3量呈顯著負相關關系(r=-0.375，p=0.024)，IL-18血清水平與激素治療劑量呈極顯著負相關關系（r=-

12、0.465，p=0.002）。
　　結論：本研究發(fā)現(xiàn)不同類型的紅斑狼瘡具有不同的細胞因子表達模式，炎癥反應程度按照DLE、SCLE、SLE的順序呈遞進關系;所檢測20個細胞因子中IL-6、IL-18、MIF、MIP-1α顯著地參與了紅斑狼瘡的發(fā)病，其中IL-18、MIF同時參與了DLE、SCLE、SLE三者的發(fā)病過程，MIP-1α相對獨立地參與SLE的疾病過程;IL-17不同程度地參與了不同類型LE炎癥形成，其表達水平在DLE與S