線粒體功能障礙致休克大鼠淋巴管低反應(yīng)性的作用.pdf

1、在嚴(yán)重缺血缺氧、重度感染及酸中毒等致病因素導(dǎo)致重癥休克的過(guò)程中，微血管對(duì)血管活性物質(zhì)，如去甲腎上腺素(NE)或P物質(zhì)(SP)的反應(yīng)性降低，從而引起休克晚期有效循環(huán)血量減少，出現(xiàn)頑固性低血壓、低組織灌注，嚴(yán)重影響了對(duì)休克的治療及其預(yù)后，是導(dǎo)致重癥休克患者出現(xiàn)多器官損傷甚至死亡的主要原因。淋巴循環(huán)是循環(huán)系統(tǒng)的重要組成部分，與休克的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究表明，在休克的發(fā)展進(jìn)程中，作為淋巴循環(huán)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)的淋巴管的收縮功能以及對(duì)于某些血管活性物質(zhì)

2、（如NE或SP等）的反應(yīng)性，均出現(xiàn)了早期升高、晚期降低的變化，提示淋巴管收縮功能以及反應(yīng)性低下是其泵功能下降的基礎(chǔ)。已有的研究發(fā)現(xiàn)，表明休克血管低反應(yīng)性的發(fā)生機(jī)制與細(xì)動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(ASMCs)線粒體結(jié)構(gòu)損傷引起能量不足、導(dǎo)致ATP敏感性鉀通道(KATP)開放與ASMCs膜超極化相關(guān)。我室前期的研究工作也發(fā)現(xiàn)，KATP參與了一氧化氮調(diào)節(jié)失血性休克后淋巴管泵功能的作用，那么，重癥失血性休克后淋巴管低反應(yīng)性的發(fā)生機(jī)制是否與線粒體損傷相關(guān)，值

3、得深入研究。
　　為此，本研究采用線粒體保護(hù)劑環(huán)孢菌素A(CsA)作為干預(yù)因素，觀察CsA對(duì)失血性休克大鼠淋巴管平滑肌細(xì)胞(LSMCs)線粒體超微結(jié)構(gòu)以及淋巴管組織中能量代謝指標(biāo)的變化，進(jìn)一步觀察CsA對(duì)失血性休克大鼠離體淋巴管收縮性及其對(duì)SP反應(yīng)性的影響，探討線粒體功能障礙在失血性休克淋巴管低反應(yīng)性中的作用，為針對(duì)線粒體保護(hù)、調(diào)節(jié)休克淋巴管泵功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　首先，將16只SPF級(jí)雄性健康Wistar大鼠隨機(jī)均分為假

4、手術(shù)組（sham組，僅進(jìn)行麻醉和與休克組相同的手術(shù)，不維持低血壓）、假手術(shù)+CsA組（進(jìn)行麻醉和手術(shù)，并在與休克+CsA組相同的時(shí)間點(diǎn)注射CsA，劑量為6 mg·kg-1）、休克組（進(jìn)行麻醉和手術(shù)，維持平均動(dòng)脈血壓40 mmHg至3h），休克+CsA組（進(jìn)行麻醉和手術(shù)，維持平均動(dòng)脈血壓40 mmHg1 h后注射CsA，劑量為6 mg·kg-1）。在低血壓3h或相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，留取胸導(dǎo)管組織，去除周圍脂肪組織后固定于戌二醛中，制備電鏡標(biāo)本，應(yīng)

5、用透射電鏡觀察CsA對(duì)失血性休克大鼠LSMCs線粒體超微結(jié)構(gòu)的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，休克組LSMCs的線粒體出現(xiàn)水腫，有明顯的電子透亮區(qū)，部分呈空泡狀，有特殊包囊物質(zhì)生成;休克+CsA組LSMCs的線粒體有部分水腫，但結(jié)構(gòu)較完整，基質(zhì)清楚均勻。結(jié)果提示，CsA可減輕失血性休克導(dǎo)致的LSMCs線粒體結(jié)構(gòu)損傷。
　　隨后應(yīng)用36只大鼠按照上述相同的分組與實(shí)驗(yàn)方法，留取胸導(dǎo)管組織標(biāo)本，超聲粉碎后應(yīng)用高效液相色譜方法檢測(cè)與線粒體功能相關(guān)的能量代

6、謝指標(biāo)ATP、ADP、AMP)的含量，并計(jì)算總腺苷酸量TAN）及能荷(EC)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，休克組淋巴管組織ATP、ADP、AMP及TAN含量均顯著低于假手術(shù)組，EC高于假手術(shù)組;休克+CsA組淋巴管組織ATP、ADP、AMP及TAN的含量均顯著高于休克組，EC與休克組相比出現(xiàn)了下降的趨勢(shì)。結(jié)果提示，CsA可減輕失血性休克引起的線粒體能量代謝功能障礙。
　　最后，應(yīng)用24只大鼠按照上述相同的分組與實(shí)驗(yàn)方法，留取胸導(dǎo)管組織，制備淋巴管環(huán)

7、，置于微血管壓力-肌動(dòng)儀浴槽內(nèi)，維持跨壁壓3 cmH2O，待淋巴管出現(xiàn)自發(fā)穩(wěn)定性收縮后，觀察并記錄淋巴管收縮頻率(CF)、舒張末期口徑(EDD)、收縮末期口徑(ESD)和被動(dòng)管徑(PD)的變化，計(jì)算淋巴管收縮幅度(CA)、泵流分?jǐn)?shù)(FPF)和緊張指數(shù)(TI)，用于評(píng)價(jià)淋巴管的收縮性，進(jìn)而觀察線粒體保護(hù)劑CsA在失血性休克大鼠離體淋巴管收縮性中的作用;然后依照梯度濃度在浴槽中由低到高順次加入梯度濃度的SP液孵育分別為1×10-8mol·L

8、-1、3×10-8 mol·L-1、1×10-7 mol·L-1、3×10-7mol·L-1），每個(gè)濃度SP均孵育3 min，期間分別記錄各組的CF、EDD、ESD、PD，并計(jì)算CA、FPF、TI，以加入梯度濃度SP前后的CF、EDD、ESD、PD的最大差值△CF、△TI、△CA、△FPF，作為評(píng)價(jià)淋巴管反應(yīng)性的指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，失血性休克后大鼠離體淋巴管的CF、FPF、TI降低，而給予線粒體保護(hù)劑CsA提高了失血性休克后淋巴管的CF、F

9、PF、TI;同時(shí)，休克組淋巴管在多個(gè)濃度點(diǎn)對(duì)SP的反應(yīng)性下降，而線粒體保護(hù)劑CsA可提高失血性休克后淋巴管在多個(gè)濃度點(diǎn)的△CF、△TI、△FPF。研究結(jié)果提示，線粒體保護(hù)劑CsA可提高休克后淋巴管的收縮性與反應(yīng)性。
　　綜上，失血性休克后LSMCs出現(xiàn)了線粒體結(jié)構(gòu)損傷與能量生成障礙，進(jìn)一步引起了淋巴管收縮性與反應(yīng)性降低;線粒體保護(hù)劑CsA可減輕線粒體損傷，改善線粒體能量代謝功能，從而提高淋巴管收縮性與反應(yīng)性。研究結(jié)果提示，線粒體功