RELM-α在APALI中病情評(píng)估價(jià)值的研究.pdf

1、目的:急性胰腺炎(AP)為常見的急腹癥，合并多器官功能障礙綜合征(MODS)的重癥急性胰腺炎(SAP)患者中死亡率高達(dá)20-30％1，其中尤以急性胰腺炎繼發(fā)急性肺損傷(APALI)最為常見及嚴(yán)重，約占SAP的14.2-35％2。若能早期從所有AP患者中篩選出存在APALI患者，對(duì)其及早進(jìn)行必要的醫(yī)療干預(yù)，對(duì)有效提高醫(yī)療資源利用率、改善患者預(yù)后及提高生存率有重大意義。
　　抵抗素樣分子-α（RELM-α）是從誘導(dǎo)過敏性肺部炎癥的小鼠

2、支氣管肺泡灌洗液中新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)分泌蛋白，既往研究發(fā)現(xiàn)RELM-α具有維護(hù)肺泡上皮細(xì)胞功能、抵抗炎癥、調(diào)控肺血管重構(gòu)、誘導(dǎo)肺血管平滑肌細(xì)胞增殖、縮血管、抗凋亡及刺激肌纖維母細(xì)胞分化等功能3。本研究擬揭示RELM-α與APALI疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性，證實(shí)RELM-α可能是SAP疾病預(yù)后的早期標(biāo)志物之一，并探討其在APALI中的作用。
　　方法:(1)采用?；悄懰徕c誘導(dǎo)急性壞死性胰腺炎(ANP)動(dòng)物模型，通過測(cè)定血清淀粉酶、C反應(yīng)蛋白(

3、CRP)水平及胰腺組織病理對(duì)其進(jìn)行評(píng)測(cè)。
　　(2)通過肺組織病理學(xué)評(píng)分、肺濕/干重系數(shù)及支氣管肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞數(shù)量評(píng)估APALI的肺組織損傷。
　　(3)通過Western Blot及免疫組化檢測(cè)肺組織中的RELM-α的表達(dá)。
　　(4)化學(xué)合成RELM-α基因，酶切目的基因PCR產(chǎn)物及載體DNA并連接，轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞克隆后抽提純化并擴(kuò)增，利用同源重組將質(zhì)粒PDC316-mCMV-EGFP-Retula和腺病毒骨

4、架載體PPE3-F35共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，獲得腺病毒重組質(zhì)粒AD5/F35-RELM-α。通過PCR及基因測(cè)序檢測(cè)RELM-α基因的表達(dá)，通過熒光顯微鏡下綠色熒光蛋白表達(dá)觀察病毒感染情況，并計(jì)算重組腺病毒的滴度;通過Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中RELM-α的表達(dá)，免疫組化檢測(cè)大鼠肺及胰腺組織中RELM-α的表達(dá)。通過觀察大鼠胰腺及肺組織病理改變，評(píng)估RELM-α過表達(dá)對(duì)組織的損傷。
　　結(jié)果:(1) ANP組血清淀粉酶及C

5、RP水平指標(biāo)顯著高于其它組（p＜0.01），ANP組胰腺組織出現(xiàn)典型SAP病理改變，表明大鼠SAP模型造模成功。
　　(2) ANP組病理學(xué)評(píng)分、大鼠肺濕/干重系數(shù)及支氣管肺泡灌洗液炎性細(xì)胞顯著高于其它組（p值均＜0.01）。
　　(3)ANP組RELM-α定位于肺泡上皮細(xì)胞，蛋白表達(dá)顯著高于其它(p＜0.05)。
　　(4)構(gòu)建并驗(yàn)證重組RELM-α腺病毒質(zhì)粒，測(cè)定AD5/F35-RELM-α病毒滴度為4×10 e1

6、0 pfu/mL，RELM-α組、空載體組、ANP組大鼠及對(duì)照組胰腺組織及肺組織光鏡下可見RELM-α組病理組織損傷最明顯(p＜0.05)，大鼠胰腺組織及肺組織光鏡下分別可見明顯的ANP及ALI病理改變。
　　結(jié)論:通過牛磺膽酸可成功制備急性壞死性胰腺炎組模型，并得到血清學(xué)及組織病理學(xué)的驗(yàn)證。RELM-α蛋白表達(dá)與肺組織損傷嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，其過表達(dá)可造成胰腺及肺組織損傷，說明其作為促炎性細(xì)胞因子，趨化和激活了炎性細(xì)胞，介導(dǎo)APA