RELM-α在APALI中病情評估價值的研究.pdf

1、目的:急性胰腺炎(AP)為常見的急腹癥，合并多器官功能障礙綜合征(MODS)的重癥急性胰腺炎(SAP)患者中死亡率高達20-30％1，其中尤以急性胰腺炎繼發(fā)急性肺損傷(APALI)最為常見及嚴重，約占SAP的14.2-35％2。若能早期從所有AP患者中篩選出存在APALI患者，對其及早進行必要的醫(yī)療干預，對有效提高醫(yī)療資源利用率、改善患者預后及提高生存率有重大意義。
　　抵抗素樣分子-α（RELM-α）是從誘導過敏性肺部炎癥的小鼠

2、支氣管肺泡灌洗液中新發(fā)現(xiàn)的一個分泌蛋白，既往研究發(fā)現(xiàn)RELM-α具有維護肺泡上皮細胞功能、抵抗炎癥、調(diào)控肺血管重構、誘導肺血管平滑肌細胞增殖、縮血管、抗凋亡及刺激肌纖維母細胞分化等功能3。本研究擬揭示RELM-α與APALI疾病嚴重程度的相關性，證實RELM-α可能是SAP疾病預后的早期標志物之一，并探討其在APALI中的作用。
　　方法:(1)采用?；悄懰徕c誘導急性壞死性胰腺炎(ANP)動物模型，通過測定血清淀粉酶、C反應蛋白(

3、CRP)水平及胰腺組織病理對其進行評測。
　　(2)通過肺組織病理學評分、肺濕/干重系數(shù)及支氣管肺泡灌洗液中炎性細胞數(shù)量評估APALI的肺組織損傷。
　　(3)通過Western Blot及免疫組化檢測肺組織中的RELM-α的表達。
　　(4)化學合成RELM-α基因，酶切目的基因PCR產(chǎn)物及載體DNA并連接，轉入感受態(tài)細胞克隆后抽提純化并擴增，利用同源重組將質(zhì)粒PDC316-mCMV-EGFP-Retula和腺病毒骨

4、架載體PPE3-F35共轉染293細胞，獲得腺病毒重組質(zhì)粒AD5/F35-RELM-α。通過PCR及基因測序檢測RELM-α基因的表達，通過熒光顯微鏡下綠色熒光蛋白表達觀察病毒感染情況，并計算重組腺病毒的滴度;通過Western Blot檢測轉染細胞中RELM-α的表達，免疫組化檢測大鼠肺及胰腺組織中RELM-α的表達。通過觀察大鼠胰腺及肺組織病理改變，評估RELM-α過表達對組織的損傷。
　　結果:(1) ANP組血清淀粉酶及C

5、RP水平指標顯著高于其它組（p＜0.01），ANP組胰腺組織出現(xiàn)典型SAP病理改變，表明大鼠SAP模型造模成功。
　　(2) ANP組病理學評分、大鼠肺濕/干重系數(shù)及支氣管肺泡灌洗液炎性細胞顯著高于其它組（p值均＜0.01）。
　　(3)ANP組RELM-α定位于肺泡上皮細胞，蛋白表達顯著高于其它(p＜0.05)。
　　(4)構建并驗證重組RELM-α腺病毒質(zhì)粒，測定AD5/F35-RELM-α病毒滴度為4×10 e1

6、0 pfu/mL，RELM-α組、空載體組、ANP組大鼠及對照組胰腺組織及肺組織光鏡下可見RELM-α組病理組織損傷最明顯(p＜0.05)，大鼠胰腺組織及肺組織光鏡下分別可見明顯的ANP及ALI病理改變。
　　結論:通過?；悄懰峥沙晒χ苽浼毙詨乃佬砸认傺捉M模型，并得到血清學及組織病理學的驗證。RELM-α蛋白表達與肺組織損傷嚴重程度呈正相關，其過表達可造成胰腺及肺組織損傷，說明其作為促炎性細胞因子，趨化和激活了炎性細胞，介導APA