miR-126、EGFL7和微血管密度在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見三大惡性腫瘤之一，其發(fā)病率低于宮頸癌及子宮內(nèi)膜癌，但惡性程度最高，病情發(fā)展快，且由于缺乏有效的早期診斷指標(biāo)，疾病發(fā)現(xiàn)時(shí)多已為中晚期，死亡率居?jì)D科腫瘤中首位，國內(nèi)外有關(guān)卵巢癌的研究眾多，但其發(fā)病原因發(fā)病機(jī)制至今仍未清楚。因卵巢癌早期癥狀不明顯、且缺乏有效的早期臨床診斷方法，多數(shù)患者確診時(shí)已出現(xiàn)腹水及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等晚期癥狀，卵巢癌預(yù)后差，雖然目前通過手術(shù)和化療能夠明顯的改善晚期卵巢癌患者的生活質(zhì)量，但5年生存率仍較低，僅

2、在30％左右[1]。因此，卵巢癌已成為嚴(yán)重威脅廣大女性生命健康最主要的婦科腫瘤。卵巢癌大多數(shù)起源于卵巢上皮組織，上皮性卵巢癌患者占卵巢癌總數(shù)的75%-90%[2]。因此，研究上皮性卵巢癌發(fā)生和發(fā)展機(jī)制，尋找有效的標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)，改善患者預(yù)后仍是目前卵巢癌研究最重要的目標(biāo)。
　　MicroRNA是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類長21~25個(gè)核苷酸的小分子RNA。通過與其靶mRNA分子的3’端非編碼區(qū)域(3’-UTR)互補(bǔ)配對(duì)使目標(biāo)mRNA分子

3、受到翻譯水平調(diào)控或直接導(dǎo)致其降解,參與調(diào)控細(xì)胞生長分化、能量代謝、凋亡等各個(gè)重要而基本的細(xì)胞生理過程[3、4]。近年來研究[5]發(fā)現(xiàn)microRNA和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后有著密切的關(guān)系。在卵巢癌中miRNA也發(fā)揮重要作用，如miR-21[64]、miR-181a[65]，其中miR-181a通過作用于其功能靶點(diǎn)Smad7，促進(jìn)TGF-β介導(dǎo)上皮間皮變信號(hào)通路參與卵巢癌的侵襲、轉(zhuǎn)移過程。而miR-126在多種腫瘤中表達(dá)下調(diào)，可能在

4、腫瘤發(fā)生過程中發(fā)揮抑癌基因的作用[6、7]，但其在卵巢癌中的研究在國內(nèi)外甚少且存在差異[8、9]。類表皮生長因子域7(EGFL7)是在內(nèi)皮細(xì)胞中特異性表達(dá)的因子，在多種實(shí)體腫瘤中表達(dá)均增高，但其在卵巢癌中的表達(dá)及作用國內(nèi)外鮮有研究。miR-126基因定位于EGFL7基因7號(hào)內(nèi)含子內(nèi)，同時(shí)在非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌等研究資料提示EGFL7也是miR-126的靶基因[10、11]。因此作者針對(duì)miR-126、EGFL7在上皮性卵巢癌的表達(dá)情況

5、進(jìn)行了研究，并探討其與微血管密度表達(dá)的相關(guān)性，以探討miR-126和EGFL7在卵巢上皮性癌發(fā)病機(jī)制中的作用，希望能為卵巢上皮性癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估和治療提供新的理論依據(jù)。
　　目的
　　研究不同卵巢上皮組織中miR-126、EGFL7和微血管密度的表達(dá)，探討它們?cè)谏掀ば月殉舶┌l(fā)生及發(fā)展中的作用及意義，并分析三者在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)的相關(guān)性及意義。
　　材料和方法
　　1．研究對(duì)象：收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院

6、及第三附屬醫(yī)院2010年3月-2014年8月手術(shù)標(biāo)本89例，正常組21例，良性組23例，惡性組45例。其中正常組卵巢取材于因良性宮體疾病行附件切除患者；良性、惡性組卵巢組織取材于術(shù)前未行化療、放療等輔助治療上皮性卵巢腫瘤患者(按FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ、Ⅱ期12例，Ⅲ、Ⅳ期33例；低分化25例，中分化11例，高分化9例；漿液性囊腺癌29例，粘液性囊腺癌8例，子宮內(nèi)膜樣癌4例，透明細(xì)胞癌4例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例。所有病例均

7、經(jīng)手術(shù)和病理證實(shí)。患者年齡27~73（47.6±5.5）歲。經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及受試者同意后進(jìn)行收集。
　　2．研究方法：采用免疫組織化學(xué)SP法對(duì)以上89例卵巢組織中EGFL7蛋白和微血管密度（CD34）的表達(dá)進(jìn)行檢測。采用定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）方法對(duì)上述89例卵巢組織中miR-126 mRNA的表達(dá)進(jìn)行檢測，對(duì)上述45例卵巢癌組織中EGFL7 mRNA的表達(dá)進(jìn)行檢測。
　　3．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：
　　采用

8、SPSS19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。miR-126相對(duì)表達(dá)量以M(P25~P75)表示,采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，組間比較用Nemeyi法檢驗(yàn)。余定量資料以?x±s表示，應(yīng)用卡方檢驗(yàn)、單因素方差分析分別比較不同卵巢組織間EGFL7蛋白陽性率及MVD計(jì)數(shù)。應(yīng)用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、單因素方差分析比較不同臨床病理參數(shù)的上皮性卵巢癌組織中miR-126、EGFL7 mRNA表達(dá)水平及MVD差異。相關(guān)性分析采用秩和spearman

9、法、Pearson積矩相關(guān)系數(shù)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，組間兩兩比較時(shí)檢驗(yàn)水準(zhǔn)α′=α/比較次數(shù)=0.0167。
　　結(jié)果
　　1．EGFL7蛋白表達(dá)陽性染色位于細(xì)胞漿，不僅位于血管內(nèi)皮細(xì)胞中，在腫瘤組織上皮細(xì)胞中也存在。EGFL7蛋白在正常組、良性組、惡性組中的陽性表達(dá)率分別為23.81%(5/21)、52.17%(12/23)、93.33%(42/45)，存在顯著差異(P<0.001)；其中EGFL7蛋白陽性表達(dá)率在正

10、常組、良性組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.0167），而EGFL7蛋白陽性表達(dá)率在正常組、惡性組間比較；良性組、惡性組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0167)。
　　2．CD34蛋白表達(dá)陽性代表組織中微血管密度的檢測。微血管密度在正常組、良性組、惡性組中的檢測值分別為6.133±2.090、11.478±2.337、21.893±3.223，存在顯著差異(P<0.001)；兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0167)。
　

11、　3.miR-126 mRNA在正常組、良性組、惡性組中的表達(dá)量分別為2.865（1.491~4.879）、1.339（0.904~2.099）、0.310（0.209~0.858），存在顯著差異(P<0.001)；其中 miR-126 mRNA的表達(dá)在正常組、良性組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而miR-126 mRNA的表達(dá)在正常組、惡性組間比較；良性組、惡性組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4．上皮性卵巢

12、癌組織中，miR-126 mRNA的表達(dá)、EGFL7 mRNA的表達(dá)和MVD的檢測均與 FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；與病理類型、組織分化程度無關(guān)(P>0.05)。
　　5.上皮性卵巢癌組織中miR-126 mRNA與EGFL7 mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r1=－0.413;P=0.005）;EGFL7 mRNA與MVD表達(dá)呈正相關(guān)（r2=0.362，P=0.015）；miR-126 mRNA與MVD表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r3

13、=－0.909，P<0.001）。
　　結(jié)論
　　1．miR-126在上皮性卵巢癌組織中異常低表達(dá)，可能參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生及發(fā)展過程。
　　2．EGFL7及微血管密度在上皮性卵巢癌組織中異常高表達(dá)，可能參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生及發(fā)展過程。
　　3.miR-126和EGFL7在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，EGFL7和微血管密度在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，miR-126和微血管密度在上皮性卵巢癌組