基于LXRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑探討消瘀化痰方藥治療NAFLD的機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察消痰化瘀中藥對(duì)非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠血清中膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及肝組織中TC含量的影響，以及對(duì)肝X受體α(LXRα)mRNA及其下游基因固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(SREBP-1c)和膽固醇7α羥化酶(CYP7A1)表達(dá)的影響，探討消痰化瘀中藥對(duì)NAFLD的治療作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法:選用雄性SD大鼠60只

2、，體重180±20g。自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)于18-22℃明暗各12小時(shí)的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按體重分層隨機(jī)分為6組，每組10只。具體分組情況如下:正常對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)正常組）、模型對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)模型組）、陽(yáng)性藥東寶肝泰對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組）和消痰化瘀中藥高劑量組（簡(jiǎn)稱(chēng)高劑量組）、消痰化瘀中藥中劑量組（簡(jiǎn)稱(chēng)中劑量組）、消痰化瘀中藥低劑量組（簡(jiǎn)稱(chēng)低劑量組），采用喂飼高脂飼料的方法復(fù)制大鼠NAFLD模型，共造模8周。造模的同時(shí)，各用藥

3、組灌服治療藥或?qū)φ账?，正常組與模型組灌服等量的生理鹽水，每天灌胃一次，每次給藥量均按1ml/100g體重計(jì)算。于最后一次給藥后禁食不禁水12h，麻醉狀態(tài)下股動(dòng)脈取血，將血樣離心，分離血清，檢測(cè)血清中TC、TG、HDL-C、LDL-和FFA的含量。同時(shí)迅速剖取肝臟，取肝右葉的部分肝組織，-70℃冰箱冷凍，以備RT-PCR法檢測(cè)LXRαmRNA、SREBP-1 cmRNA和CYP7A1mRNA的表達(dá)變化。并取適宜大小的肝組織置于4％多聚甲醛

4、液中固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察肝組織形態(tài)學(xué)的變化。另取少許肝組織冷凍以備檢測(cè)肝勻漿TC、TG的含量。
　　結(jié)果:
　　1、各組大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C和FFA的含量變化
　　模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C的含量(3.298±0.256，1.180±0.153，2.743±0.466，436.481±52.151)比正常組(1.371±0.196，0.512±0.093，0.440±

5、0.050，243.335±50.284)均明顯升高(P＜0.01)，HDL-C含量(0.719±0.098)比正常組(1.119±0.186)明顯降低(P＜0.01)，說(shuō)明大鼠出現(xiàn)明顯的血脂異常，顯示造模成功。與模型組比較，各用藥組均能明顯降低大鼠TC、TG、LDL-C和FFA的含量，升高HDL-C的含量(P＜0.01)。其中消痰化瘀高、中、低三個(gè)劑量組的TC（1.484±0.239，1.690±0.271，1.741±0.269）、

6、TG（0.554±0.098，0.574±0.093，0.669±0.105）、 LDL-C(0.885±0.181，1.095±0.266，1.215±0.289)和FFA（242.191±35.130，259.780±29.330，277.622±34.284）的含量均低于對(duì)照組(2.131±0.352，0.827±0.109，1.593±0.313,324.051±56.061)(P＜0.05或P＜0.01),HDL-C(1.48

7、0±0.219，1.296±0.228，1.305±0.233)的含量高于對(duì)照組(1.123±0.131)(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組TC、TG、LDL-C和FFA的含量低于低劑量組(P＜0.05），HDL-C的含量高于中、低劑量組（P＜0.05），中劑量組TC、TG、LDL-C和FFA的含量雖低于低劑量組，HDL-C的含量雖高于低劑量組，但統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均未見(jiàn)顯著性差異(P＞0.05）。
　　2、各組大鼠肝組織中TC、T

8、G的含量變化
　　模型組大鼠肝組織TC、TG的含量(15.982±2.366，36.979±4.283)明顯高于正常組（6.129±0.843，21.280±3.031）(P＜0.01）;與模型組比較，各用藥組大鼠肝組織TC、TG的含量均明顯降低(P＜0.01)。其中，消痰化瘀中藥高、中、低三個(gè)劑量組肝組織TC（7.145±0.819，8.592±0.948，9.963±1.044）、TG(23.650±3.276，24.409±

9、3.150，26.368±3.598)的含量均低于陽(yáng)性藥對(duì)照組（10.946±1.871，29.591±4.376）(P＜0.05或P＜0.01);高、中劑量組TC的含量低于低劑量組(P＜0.05)，高劑量組低于中劑量組(P＜0.05）;高劑量組TG的含量低于低劑量組(P＜0.05)，而高、中劑量組之間未見(jiàn)顯著性差異（P＞0.05）。
　　3、各組大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的變化
　　正常組大鼠肝小葉和肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列整齊，

10、圍繞中央靜脈呈放射狀，細(xì)胞核形態(tài)正常，胞漿均勻。模型組大鼠肝細(xì)胞排列紊亂，脂肪變性明顯，細(xì)胞形狀不規(guī)則，大小不一致，多數(shù)胞漿中可見(jiàn)大小不等、數(shù)目眾多的脂肪滴，細(xì)胞核偏離正常位置。與模型組比較，各治療組大鼠肝細(xì)胞脂肪空泡和脂滴數(shù)量顯著減少，肝小葉和肝血竇結(jié)構(gòu)比較清晰，脂肪變性程度均有明顯改善。
　　4、各組大鼠肝組織LXRαmRNA表達(dá)的變化
　　模型組大鼠肝組織LXRαmRNA的表達(dá)(1.337±0.216)明顯低于正常組(

11、0.426±0.056)(P＜0.01)。經(jīng)藥物干預(yù)后，各用藥組LXRαmRNA的表達(dá)均高于模型組(P＜0.01);其中，消痰化瘀高、中、低劑量組的LXRαmRNA表達(dá)（0.537±0.059，0.605±0.072，0.691±0.083）均低于對(duì)照組（0.772±0.052）(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組LXRαmRNA的表達(dá)低于中、低劑量組(P＜0.05或P＜0.01)，中劑量組低于低劑量組(P＜0.05)。
　　

12、5、各組大鼠肝組織SREBP-1c表達(dá)的變化
　　模型組大鼠肝組織SREBP-1cmRNA的表達(dá)（1.026±0.236）明顯高于正常組（0.361±0.051）(P＜0.01）;與模型組比較，各用藥組SREBP-1 cmRNA的表達(dá)均明顯降低(P＜0.01);其中，消痰化瘀高、中、低劑量組的SREBP-1 cmRNA表達(dá)（0.503±0.061，0.532±0.072，0.581±0.041）均低于對(duì)照組（0.636±0.033

13、）（P＜0.05或P＜0.01）;高劑量組SREBP-1 cmRNA的表達(dá)低于低劑量組（P＜0.05）;高、中劑量組之間未見(jiàn)顯著性差異((P＞0.05)。
　　6、各組大鼠肝組織CYP7A1mRNA表達(dá)的變化
　　模型組大鼠肝組織CYP7A1mRNA的表達(dá)（0.295±0.044）明顯低于正常組(0.782±0.091)(P＜0.01);與模型組比較，各用藥組CYP7A1mRNA的表達(dá)均明顯升高(P＜0.01）。其中，消痰化

14、瘀高、中、低劑量組的SREBP-1cmRNA表達(dá)（0.653±0.071，0.522±0.063，0.619±0.081）均高于對(duì)照組（0.459±0.066）(P＜0.01);高、低劑量組CYP7A1mRNA表達(dá)量高于中劑量組(P＜0.01)，而高、低劑量組之間未見(jiàn)顯著性差異(P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、消痰化瘀中藥能降低非酒精性脂肪肝大鼠血清TC、TG、LDL-C的含量，升高HDL-C的含量，具有良好的調(diào)節(jié)血脂

15、作用。
　　2、消痰化瘀中藥能明顯改善非酒精性脂肪肝大鼠肝組織脂變程度，表現(xiàn)為用藥后肝組織TC、TG的含量明顯降低，光鏡下可見(jiàn)肝細(xì)胞脂肪變程度明顯減輕，脂肪空泡和脂滴數(shù)量顯著減少。
　　3、消痰化瘀中藥能抑制非酒精性脂肪肝大鼠肝組織LXRαmRNA的過(guò)度表達(dá)，降低脂質(zhì)在肝臟的沉積，從而達(dá)到防治非酒精性脂肪肝的目的。
　　4、消痰化瘀中藥能抑制非酒精性脂肪肝大鼠肝組織SREBP-1c的過(guò)度表達(dá)，減少脂肪合成，阻止脂質(zhì)在肝