粒細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)造血干細(xì)胞動員過程中對成骨細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:粒細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)造血干細(xì)胞動員過程中對成骨細(xì)胞的影響
　　方法:本研究以C57BL野生型小鼠和人成骨細(xì)胞為研究對象，予C57BL野生型小鼠注射粒細(xì)胞集落刺激因子，應(yīng)用流式細(xì)胞儀、骨髓免疫組化、ELISA法檢測粒細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)造血干細(xì)胞動員前后不同時(shí)點(diǎn)的小鼠外周血和骨髓標(biāo)本，觀察骨髓成骨細(xì)胞在粒細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)造血干細(xì)胞動員前后的變化。粒細(xì)胞集落刺激因子及低氧模擬劑氯化鈷(CoCl2)處理人成骨細(xì)胞，應(yīng)用細(xì)胞計(jì)

2、數(shù)試劑盒檢測人成骨細(xì)胞的增殖，以明確低氧對人成骨細(xì)胞增殖的影響。熒光定量PCR檢測經(jīng)粒細(xì)胞集落刺激因子和CoCl2處理前后人成骨細(xì)胞骨保護(hù)素基因和破骨細(xì)胞分化因子基因相對表達(dá)量的水平。westernblot檢測經(jīng)粒細(xì)胞集落刺激因子和CoCl2處理前后人成骨細(xì)胞骨保護(hù)素、破骨細(xì)胞分化因子和低氧誘導(dǎo)因子-1α的蛋白表達(dá)水平，明觀察低氧對人成骨細(xì)胞活性的影響。
　　結(jié)果:①粒細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)動員后小鼠外周血Lin-Sca1+cKit

3、+細(xì)胞占有核細(xì)胞的比例中day5顯著高于day0、day3(0.61±0.05％ VS0.04±0.01％、0.10±0.02％，P＜0.05)。②粒細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)動員過程中骨髓成骨細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，形態(tài)由原來卵圓形變?yōu)楸馄叫巍⑺笮?。粒?xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)動員后骨髓成骨細(xì)胞計(jì)數(shù)day5顯著低于day0、day3（10.0±1.7 VS40.0±3.1、23.0±2.5， OB.N/B.s，P＜0.05）。③粒細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)動

4、員后外周血OCN蛋白表達(dá)水平day3和day5顯著低于day0(9.93±2.12ng/ml、9.46±1.66ng/ml VS23.21±2.17ng/ml,P＜0.05)④CoCl2處理人成骨細(xì)胞4h、24h、48h、72h、96h、144h的增殖率分別為0.487±0.018、0.830±0.040、1.482±0.034、1.736±0.047、2.141±0.052、2.515±0.049，對照組人成骨細(xì)胞相應(yīng)時(shí)段的增殖率分別

5、為0.614±0.019、0.988±0.025、1.628±0.049、2.000±0.038、2.363±0.040、2.741±0.075，粒細(xì)胞集落刺激因子處理人成骨細(xì)胞相應(yīng)時(shí)段的增殖率分別為0.559±0.038、0.992±0.020、1.619±0.073、1.920±0.089、2.412±0.088、2.558±0.116，經(jīng)CoCl2處理各時(shí)間段人成骨細(xì)胞的增殖率均顯著低于對照組(P＜0.05)，經(jīng)粒細(xì)胞集落刺激因子

6、處理各時(shí)間段人成骨細(xì)胞的增殖率與對照組差別均無顯著性意義(P＞0.05)。⑤實(shí)驗(yàn)組（100uM CoCl2培養(yǎng)48h）人成骨細(xì)胞骨保護(hù)素基因的相對表達(dá)量顯著低于對照組（0.71±0.12 VS1.30±0.15，P＜0.05）。⑥實(shí)驗(yàn)組（100uM CoCl2培養(yǎng)48h）人成骨細(xì)胞破骨細(xì)胞分化因子基因的相對表達(dá)量顯著低于對照組（0.84±0.02 VS1.06±0.03，P＜0.05）。⑦人成骨細(xì)胞經(jīng)CoCl2處理后，骨保護(hù)素和破骨細(xì)胞