細胞角蛋白19片段定量檢測試劑盒的研制及應(yīng)用.pdf

1、細胞角蛋白19片段（Cyfra21-1），是一種主要用于肺癌輔助診斷的腫瘤標志物。尤其對非小細胞肺癌具有較高的診斷價值，對各類非小細胞肺癌的陽性檢出率可達到70％～85%。當患者血清中Cyfra21-1的濃度超過30ng/mL，且影像學檢測顯示肺部存在不清晰的環(huán)形陰影時，則診斷為原發(fā)性支氣管肺癌的可能性較高。
　　血清中Cyfra21-1的濃度水平高低，通常與腫瘤的治療效果及臨床分期呈正相關(guān)，治療成功的標志是血清Cyfra21-1

2、的濃度迅速下降，反之則表示疾病的復發(fā)或病灶未完全清除，所以，Cyfra21-1可作為肺癌患者手術(shù)治療效果評價、預后復發(fā)監(jiān)測的有效指標之一。
　　本文完成了細胞角蛋白19片段定量檢測試劑盒（磁微?；瘜W發(fā)光法）的研制與開發(fā)，試劑盒各項性能指標符合要求，經(jīng)臨床評價，可用于定量檢測人血清中的細胞角蛋白19片段。
　　研究方法和結(jié)果：
　　1.主要原材料研究：
　　通過免疫小鼠得到72株Cyfra21-1系單克隆抗體。經(jīng)優(yōu)

3、化篩選得到一對與Roche臨床相關(guān)性較好的抗體配對，作為試劑盒開發(fā)的原材料，并制定了Cyfra21-1試劑盒的原材料質(zhì)量標準。
　　2.試劑盒組份的制備工藝研究：
　　磁微?；鞈乙旱闹苽涔に嚍椋呼然鶅刹椒ò唬粷舛?.5μg/T，磁微粒封保液配方為含2%牛血清白蛋白的 PBS緩沖液；酶結(jié)合物稀釋液的配方為含1%牛血清白蛋白的Taps緩沖液，酶結(jié)合物工作濃度為1:2000；校準品稀釋液的配方為含20%小牛血清的Tris緩沖

4、液（pH7.4，0.05M），校準品量值可溯源至羅氏非小細胞肺癌相關(guān)抗原21-1定量測定試劑盒。
　　3.試劑盒的分析性能研究：
　　精密性：分析內(nèi)、分析間變異＜8%，批間變異＜12%；
　　特異性：內(nèi)源性干擾物質(zhì)400mg/dL的血紅蛋白、5000mg/dL的甘油三酯、50mg/dL的膽紅素對試劑盒的干擾小于10%；
　　靈敏度：試劑盒的分析靈敏度約為0.04ng/mL，試劑盒的功能靈敏度,約為0.2ng/mL

5、；
　　準確性：試劑盒的回收率為100±10%，滿足回收率在85%～115%之間的要求；
　　4.試劑盒的穩(wěn)定性研究：
　　考核了整套試劑盒的加速破壞穩(wěn)定性（37℃,10天）、模擬運輸穩(wěn)定性（37℃,車載10天）、凍融穩(wěn)定性（反復凍融5次），與2～8℃保存試劑盒相比，臨床檢測值偏差小于10%，各項性能指標具符合要求。實時穩(wěn)定性（2～8℃儲存14個月），載機穩(wěn)定性（載機28天），臨床檢測值偏差小于10%，各項性能指標均符

6、合要求。
　　5.參考值的建立：
　　考核正常人體檢樣本980例，其中男性477例，女性503例。利用SPSS13.0軟件對980例樣本的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，取95%的百分位數(shù)數(shù)值，得出試劑盒的參考值為3.30ng/mL。
　　6.臨床研究：
　　考核了臨床樣本529例，考核試劑盒與對比試劑盒的直線回歸方程為y=0.9883x－0.1015，相關(guān)系數(shù)R2=0.9965，陽性符合率為98.07%，陰性符合率為95.

7、08%，總符合率為97.73%。說明兩種試劑盒具有較好的相關(guān)性，可用于血清中Cyfra21-1的定量檢測。
　　結(jié)論：
　　本文完成了細胞角蛋白19片段定量檢測試劑盒（磁微?；瘜W發(fā)光法）的研制與開發(fā)，評估了試劑盒的精密性、特異性、準確度、穩(wěn)定性等性能指標。與已上市的同類試劑盒相比，本試劑盒具有較好的臨床符合率和檢測準確度。本試劑盒具有成本經(jīng)濟、檢測準確等優(yōu)點，將為臨床檢驗實驗室提供一種性價比更高的Cyfra21-1定量檢測試