AGEs致骨關(guān)節(jié)炎兔模型的建立與吡格列酮的干預(yù)作用研究.pdf

1、目的:探討關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射糖基化試劑D-核糖結(jié)合運動負荷建立AGEs致骨關(guān)節(jié)炎兔模型的方法，研究AGEs在關(guān)節(jié)內(nèi)累積對關(guān)節(jié)軟骨的影響及研究吡格列酮的保護作用。
　　方法:1、以新西蘭大白兔為研究對象，8只自由飼養(yǎng)1周，全程進行視頻監(jiān)測與運動軌跡記錄，計算兔日常平均活動距離S;2、取兔32只，隨機分為低劑量組、中劑量組、高劑量組與對照組4組，各組兔每天在改良跑步機上運動以增加運動負荷，距離為6S;低、中、高劑量組兔分別于膝關(guān)節(jié)腔注射12

2、3mmol/L（低劑量組）、350mmol/L（中劑量組）、1000mmol/L（高劑量組）糖基化試劑D-核糖0.5ml提高AGEs水平，對照組兔膝關(guān)節(jié)注射等量PBS，每周注射2次，持續(xù)7周，恢復(fù)1周后處死，關(guān)節(jié)穿刺取滑液，手術(shù)取股骨髁、脛骨平臺做大體及組織病理學觀察，以O(shè)ARSI大體評分標準進行大體評分，以改良Mankin評分標準進行組織學評分，采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測滑液及軟骨中AGEs、PPARγ、MMP-13、TNF-α

3、的表達，評價造模效果;3、取16只兔隨機分為2組，各組兔每天在改良跑步機上運動以增加運動負荷，距離為6S;實驗組口服吡格列酮20mg/kg/d，對照組口服同等劑量安慰劑羧甲基纖維素鈉;于兩組兔膝關(guān)節(jié)腔注射1000mmol/L糖基化試劑D-核糖0.5ml提高AGEs水平，每周注射2次，持續(xù)7周，恢復(fù)1周后處死，對關(guān)節(jié)進行大體評分（OARSI大體評分標準）和組織學評分（改良Mankin評分標準），采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測滑液及軟骨中

4、AGEs、PPARγ、MMP-13、TNF-α的表達，觀察吡格列酮對模型動物的軟骨保護作用。
　　結(jié)果:1、新西蘭大白兔自由飼養(yǎng)的日平均運動距離約為50米;2、膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射糖基化試劑D-核糖結(jié)合距離為300米的運動負荷后，關(guān)節(jié)軟骨與滑液中AGEs、MMP-13、TNF-α水平均高于對照組，隨著D-核糖濃度增加而升高，關(guān)節(jié)滑液與軟骨中PPARγ表達隨D-核糖濃度增加而降低，關(guān)節(jié)軟骨損傷隨D-核糖濃度增加而加重，大體評分與組織學評分

5、均表現(xiàn)出軟骨損傷的改變;3、模型動物口服吡格列酮后，關(guān)節(jié)軟骨和滑膜內(nèi)AGEs水平與安慰劑組相比無顯著性差異，但MMP-13、TNF-α表達降低，吡格列酮組大體評分與組織學評分明顯低于安慰劑組(P＜0.01)。
　　結(jié)論:1、兔膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射D-核糖結(jié)合運動負荷能夠升高關(guān)節(jié)軟骨與滑液中AGEs濃度，模擬關(guān)節(jié)內(nèi)AGEs堆積;2、關(guān)節(jié)內(nèi)注射D-核糖結(jié)合每日21分鐘300米的運動負荷可引起關(guān)節(jié)軟骨與滑液中MMP-13、TNF-α的表達增多