高脂環(huán)境下大鼠BMSCs成骨分化過(guò)程中Wnt通路相關(guān)因子的表達(dá)變化.pdf

1、背景:
　　高脂血癥與骨質(zhì)疏松癥發(fā)病率日益增加，眾多研究表明兩者聯(lián)系密切，然而兩者之間的具體發(fā)病機(jī)制仍不清楚。Wnt信號(hào)通路為近年來(lái)骨代謝研究熱點(diǎn)。
　　目的:
　　觀察高脂環(huán)境下大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)成骨分化過(guò)程中Wnt信號(hào)通路相關(guān)因子的表達(dá)變化，以期探討高脂血癥導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的可能機(jī)制。
　　方法:
　　Wistar大鼠BMSCs進(jìn)行培養(yǎng)及傳代，采用第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。待第三代細(xì)胞融匯至80％后

2、，實(shí)驗(yàn)分為兩組:高脂組、對(duì)照組，每組有三個(gè)樣本，兩組細(xì)胞向成骨誘導(dǎo)期間倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)變化;成骨誘導(dǎo)5天、7天、14天堿性磷酸酶(ALP)活性檢測(cè)觀察兩組BMSCs早期成骨細(xì)胞分化情況;28天茜素紅染色觀察細(xì)胞外基質(zhì)礦化能力;成骨誘導(dǎo)14天油紅O染色觀察兩組BMSCs成脂分化情況;成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)7天、14天、21天采用RT-PCR檢測(cè)兩組細(xì)胞Wnt信號(hào)通路相關(guān)因子Wnt3a、LRP5、β-catenin、sFRP1 mRNA的表達(dá)

3、，以及脂肪代謝因子PPAR-γmRNA的表達(dá);同時(shí)7天、14天、21天Western Bolt檢測(cè)兩組細(xì)胞β-catenin的蛋白表達(dá)量。SPSS17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　BMSCs培養(yǎng)到第三代，細(xì)胞形態(tài)趨于一致。ALP活性檢測(cè)顯示其活性隨時(shí)間延長(zhǎng)而增大，但增長(zhǎng)速度減慢，7天、14天高脂組活性均低于對(duì)照組。茜素紅染色結(jié)果顯示對(duì)照組鈣結(jié)節(jié)量形成多于高脂組。油紅O結(jié)果顯示高脂組中紅染的脂肪細(xì)胞多于對(duì)照組。RT

4、-PCR結(jié)果顯示在7天時(shí)sFRP1、PPAR-γ表達(dá)量對(duì)照組低于高脂組，差異有顯著意義(p＜0.01)，14天時(shí)Wnt3a、β-catenin表達(dá)量對(duì)照組高于高脂組(p＜0.05)，sFRP1、PPAR-γ表達(dá)量對(duì)照組低于高脂組，差異有意義(p＜0.01)，21天時(shí)LRP5、β-catenin表達(dá)量對(duì)照組高于高脂組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。Western Blot結(jié)果顯示，在第14天、21天高脂組較對(duì)照組β-catenin蛋白的表

5、達(dá)明顯下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.高脂環(huán)境下BMSCs向成骨細(xì)胞分化減少。
　　2.不同時(shí)間段Wnt信號(hào)通路相關(guān)因子的表達(dá)變化不一致，成骨分化早期sFRP1起作用，成骨分化中期Wnt3a起作用，β-catenin在成骨分化中末期發(fā)揮效應(yīng)，LRP5在成骨分化末期變化顯著，其具體原因需進(jìn)一步探討。
　　3.Wnt信號(hào)通路參與BMSCs成骨細(xì)胞分化過(guò)程中，其相關(guān)因子之間聯(lián)系密切，高脂環(huán)