Bcl-3和RelB促進(jìn)食管癌發(fā)生作用的研究.pdf

1、食管癌是目前世界范圍內(nèi)發(fā)病率第八，致死率第六的惡性腫瘤。根據(jù)目前的研究，食管癌發(fā)生過程受多種因素影響，包括環(huán)境因素、遺傳因素、飲食習(xí)慣。同時，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，也發(fā)現(xiàn)食管癌的發(fā)生過程會有多種癌癥基因的激活或者抑癌基因的突變失活。食管癌目前主要的治療方法包括手術(shù)、化療、放療，但是病人個體差異大，預(yù)后差，死亡率高。了解食管癌發(fā)病機制，探索新的治療方式，尋找潛在的靶標(biāo)分子，成了重要的研究方向之一。
　　Bcl-3是一個原癌基因，作為

2、非典型的IκB家族成員之一，Bcl-3定位于核內(nèi),激活或者抑制NF-κB通路轉(zhuǎn)錄活性。目前已經(jīng)在包括直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等多種腫瘤中被檢測到其表達(dá)較正常組織異常增高。在腫瘤的發(fā)生轉(zhuǎn)移等過程中可能是通過調(diào)控細(xì)胞周期或者抑制細(xì)胞凋亡來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生增殖。RelB是NF-κB信號通路非經(jīng)典途徑重要的一員，可以沉默或者激活一些基因。目前有研究指出，RelB在多種癌癥中調(diào)節(jié)抗凋亡基因，在前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌中都被檢測到處于激活狀態(tài)，可

3、以在促進(jìn)腫瘤的發(fā)生或者抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡方面發(fā)揮功能。但是，目前Bcl-3和RelB在食管癌中的作用鮮有報道。本文主要采用RNA干擾技術(shù)，敲低食管癌細(xì)胞系Bcl-3和RelB的表達(dá)，從而研究Bcl-3和RelB對食管癌發(fā)生的作用。本文主要應(yīng)用的方法如下：
　　1)利用RNA干擾技術(shù)，慢病毒包裝感染食管癌細(xì)胞系EC109和KYSE510，進(jìn)行基因敲低，構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Bcl-3和RelB敲低細(xì)胞系，并利用實時熒光定量PCR和免疫印跡（

4、western blot）技術(shù)檢測敲低效果；2)體外實驗：采用細(xì)胞增殖實驗，平板克隆形成實驗，分別檢測 Bcl-3、RelB敲低后，食管癌細(xì)胞系EC109和KYSE510體外增殖能力的變化；3)體內(nèi)成瘤實驗：裸鼠皮下注射 Bcl-3、RelB敲低食管癌細(xì)胞系EC109懸液，轉(zhuǎn)染的tGFP細(xì)胞EC109懸液作為陰性對照，多西環(huán)素加水誘導(dǎo)，正常飼養(yǎng)3周后，剝離腫瘤，觀察兩組差異；4)
　　收集食管癌病人組織以及癌旁正常食管上皮組織樣本

5、，制作組織芯片，利用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測組織中Bcl-3及p-Bcl3蛋白表達(dá)量；
　　實驗得到了以下結(jié)果：
　　1)敲低Bcl-3可以抑制食管癌細(xì)胞系EC109和KYSE510的體外增殖以及EC109的體內(nèi)成瘤能力；2)敲低RelB可以抑制食管癌細(xì)胞系EC109和KYSE510的體外增殖能力；3) Bcl-3和p-Bcl-3在食管癌病人組織中高表達(dá)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)。
　　通過以上實驗結(jié)果，可以得出