芍藥苷通過A1腺苷受體對(duì)膿毒癥小鼠心功能保護(hù)作用的研究.pdf

1、第一部分芍藥苷對(duì)膿毒癥小鼠死亡率的影響
　　目的：觀察芍藥苷對(duì)膿毒癥小鼠死亡率的影響及可能的藥理機(jī)制
　　方法：1.1不同劑量芍藥苷（Pae）對(duì)膿毒癥小鼠死亡率的影響
　　利用SPF級(jí)體重在30-35g之間的雄性昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過經(jīng)典盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)的方法建立小鼠膿毒癥模型，60只小鼠隨機(jī)分為①假手術(shù)組（Sham組）+蒸餾水組；②CLP+蒸餾水組；③CLP+芍藥苷（10mg/kg）組；④ CLP+芍藥苷（20mg/

2、kg）；⑤CLP+芍藥苷（40mg/kg）；⑥CLP+芍藥苷（80mg/kg），每組10只。Sham組與CLP對(duì)照組于術(shù)后4小時(shí)及術(shù)后連續(xù)3天用蒸餾水按0.1ml/10g灌胃，不同劑量的芍藥苷組分別于術(shù)后4小時(shí)及術(shù)后3天按相應(yīng)劑量灌胃給藥。觀察10天內(nèi)各組小鼠死亡率的情況，選出本實(shí)驗(yàn)條件下合適的芍藥苷劑量。
　　1.2不同劑量A1腺苷受體特異性阻斷劑（DPCPX）對(duì)膿毒癥小鼠死亡率的影響
　　實(shí)驗(yàn)小鼠按以下分組①CLP+NS

3、組；②CLP+DMSO（以50％的二甲基亞砜作為DPCPX的藥物溶劑）組；③CLP+DPCPX(1 mg/kg)；④ CLP+DPCPX(2 mg/kg)；⑤CLP+DPCPX(4 mg/kg)；NS及DMSO對(duì)照組于CLP術(shù)前30 min及術(shù)后3.5 h按0.1 ml/10 g皮下注射生理鹽水或50%DMSO，實(shí)驗(yàn)組于CLP術(shù)前30 min及術(shù)后3.5h按相應(yīng)劑量皮下注射DPCPX。觀察10天內(nèi)各組小鼠死亡率的情況，選出本實(shí)驗(yàn)條件下合

4、適的DPCPX劑量。
　　1.3使用DPCPX(1 mg/kg)阻斷A1腺苷受體作用后，觀察Pae(20 mg/kg)對(duì)膿毒癥小鼠死亡率的影響
　　實(shí)驗(yàn)小鼠分組如下：①CLP+DMSO+ H2O；②CLP+DMSO+Pae；③CLP+DPCPX+H2O；④ CLP+DPCPX+Pae。DPCPX實(shí)驗(yàn)組小鼠于術(shù)前30min、術(shù)后3.5h及術(shù)后連續(xù)3d經(jīng)背部皮下按1mg/kg劑量給予DPCPX；DMSO對(duì)照組于術(shù)前30min、術(shù)

5、后3.5h及術(shù)后連續(xù)3d經(jīng)背部皮下按0.1ml/10g皮下給藥；Pae組于術(shù)后4h及術(shù)后3d按20mg/kg劑量灌胃給藥，蒸餾水對(duì)照組于術(shù)后4h及術(shù)后3d按0.1ml/10g灌胃。觀察10天內(nèi)各組小鼠死亡率的情況，統(tǒng)計(jì)分析組間小鼠死亡率差異。
　　結(jié)果：
　　1.20mg/kg的劑量治療組的膿毒癥小鼠的死亡率為10%，平均生存時(shí)間為：9.1±2.8天，明顯高于其他劑量組（P<0.05）。該劑量能夠明顯改善小鼠膿毒癥癥狀從而降

6、低小鼠的死亡率。
　　2.1mg/kg劑量的DPCPX組的小鼠死亡率為55%，平均生存時(shí)間為：5.7±1.2天，高于4mg/kg劑量2.6±0.67天（P<0.05），與2mg/kg劑量組（5.9±1.2天）無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　3.使用1mg/kg劑量的DPCPX阻斷A1R作用后，CLP+DPCPX+H2O組10天生存率為17%，平均存活時(shí)間為2.8±1.0天，明顯低于CLP+DMSO+H2O組（6.7±1.

7、1天）（P<0.05）；CLP+DPCPX+Pae組（4.09±1.13天）明顯低于CLP+DMSO+Pae組（平均存活時(shí)間：9.1±0.78天）（P<0.05）。此劑量DPCPX能夠加重膿毒癥小鼠癥狀，并且顯著抑制Pae對(duì)膿毒癥小鼠的治療作用。
　　小結(jié)：
　　1.20mg/kg的劑量的Pae經(jīng)灌胃給藥能顯著降低膿毒癥小鼠的死亡率。
　　2. Pae可通過腺苷A1受體發(fā)揮其降低膿毒癥小鼠死亡率的作用。
　　第二

8、部分應(yīng)用A1腺苷受體抑制劑阻斷 A1R的作用后芍藥苷對(duì)膿毒癥小鼠器官功能的影響
　　目的：在死亡率的前提下進(jìn)一步探討芍藥苷對(duì)膿毒癥小鼠各器官功能的影響。
　　方法：實(shí)驗(yàn)造模分組如下①CLP+DMSO+H2O；②CLP+DMSO+Pae；③CLP+DPCPX+ H2O；④ CLP+DPCPX+Pae；⑤Sham+DMSO+H2O；⑥Sham+DMSO+Pae；⑦Sham+DPCPX+H2O；⑧Sham+DPCPX+Pae。Pa

9、e、DPCPX在假手術(shù)組及CLP組給藥方式、時(shí)間同前。多次分批造模于術(shù)后12h、24h采血取材，收集血清樣品由于測(cè)定血清門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、尿素氮(BUN)和肌酐(CR)的水平。
　　結(jié)果：1.術(shù)后12h，CLP各組小鼠CR、BUN、ALT、AST水平均高于假手術(shù)組（P<0.05），CLP+DMSO+Pae組 CR、BUN值低于 CLP+DMSO+H2O組（P<0.05）。CLP+DPCPX+

10、H2O組AST高于CLP+DMSO+H2O組（P<0.05）。2.術(shù)后24h，各組小鼠CR、BUN無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；CLP+DMSO+Pae組AST低與CLP+DMSO+H2O組（P<0.05），CLP+H2O+DPCPX組ALT、AST高于CLP+DMSO+H2O組（P<0.05）。
　　小結(jié)：Pae具有減輕膿毒癥小鼠肝、腎組織器官功能損害的作用，應(yīng)用腺苷A1受體抑制劑DPCPX后該保護(hù)作用被阻斷。
　　第三部

11、分芍藥苷通過A1腺苷受體對(duì)膿毒癥小鼠心功能的保護(hù)作用
　　目的：觀察芍藥苷通過A1腺苷受體對(duì)膿毒癥小鼠心功能的保護(hù)作用。
　　方法：實(shí)驗(yàn)造模分組及給藥方式均同第二部分，在造模12h、24h后用小動(dòng)物超聲系統(tǒng)，測(cè)定小鼠心率（HR）、每博輸出量（SV）、心輸出量（CO）、左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF%）、短軸縮短率（FS%）、二尖瓣環(huán)舒張?jiān)缙诜逯邓俣龋‥）與舒張晚期峰值速度（A)比值（E/A)。在造模24h后，取心臟組織勻漿后測(cè)定心

12、肌組織中LDH水平。
　　結(jié)果：膿毒癥小鼠在CLP術(shù)后12h、24h可表現(xiàn)出SV、CO、E/A比值下降的心功能收縮和舒張障礙，其中CLP+DMSO+Pae組SV、CO、E/A比值均高于其他模型組（P<0.05）；
　　LDH結(jié)果顯示：CLP+DMSO+H2O組LDH活性較Sham+DMSO+H2O組升高（P<0.05）；CLP+DPCPX+H2O組則較CLP+DMSO+H2O組升高（P<0.05）；CLP+DMSO+Pae組

13、LDH活性顯著低于其他CLP模型組（P<0.05）。
　　小結(jié)：芍藥苷能通過激活腺苷A1受體減輕膿毒癥小鼠心肌細(xì)胞損傷，改善其心肌收縮及舒張功能。
　　第四部分芍藥苷通過A1腺苷受體對(duì)膿毒癥小鼠心功能的保護(hù)作用的機(jī)制
　　目的：探討芍藥苷通過A1腺苷受體對(duì)膿毒癥小鼠心功能的保護(hù)作用的機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)造模分組及給藥方式均同第二部分，在造模24h后，取心臟組織勻漿后測(cè)定心肌組織中SOD水平及MDA的含量。

14、>　　結(jié)果：CLP+DMSO+H2O組SOD活性低于Sham組（P<0.05)，CLP+DMSO+Pae組SOD活性高于其他模型組（P<0.05)；CLP+DMSO+H2O組MDA水平高于Sham組（P<0.05)，CLP+DMSO+Pae組MDA水平則顯著低于其他模型組（P<0.05)。Sham組各組之間SOD活性與MDA水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05)。
　　小結(jié)：芍藥苷通過干預(yù)心肌組織氧自由基代謝，增強(qiáng)SOD活性，增強(qiáng)清除