不明原因不育癥患者精子超微結(jié)構(gòu)的研究.pdf

1、目的：
　　以不明原因不育癥患者精液精子為研究材料，利用透射電鏡觀(guān)察其精子超微結(jié)構(gòu)的畸變，探討其超微結(jié)構(gòu)的畸變與男性不育之間的關(guān)系，比較常規(guī)電鏡包埋的材料與僅用戊二醛固定材料超微結(jié)構(gòu)下頭部空泡的的差異并分析其物質(zhì)組成。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)一：研究對(duì)象為結(jié)婚2年，女方生殖系統(tǒng)功能正常，原因不明不育癥患者8例和結(jié)婚1年孕育有孩子的正常生育男性3例。研究對(duì)象在禁欲3-7天后，于室溫自行按摩取精。待精液自動(dòng)液化后，一部分緩慢

2、注入離心管，以650g離心10min，棄去上層精漿，沉淀精子用瓊脂糖進(jìn)行預(yù)包埋，戊二醛固定1h后，PBS（pH=7.2）漂洗3次（10min/次），鋨酸固定1h，然后用 Epon812環(huán)氧樹(shù)脂包埋，超薄切片用醋酸鈾-檸檬酸鉛雙重染色，透射電子顯微鏡觀(guān)察。主要觀(guān)察精子的頂體、細(xì)胞核、線(xiàn)粒體和微管等超微結(jié)構(gòu)改變。
　　實(shí)驗(yàn)二：研究對(duì)象同實(shí)驗(yàn)一。利用透射電鏡對(duì)8例不明原因不育癥患者和3例正常生育男性精液精子常規(guī)處理的電鏡材料與僅用戊二醛

3、固定和醋酸鈾染色處理的電鏡材料進(jìn)行對(duì)比研究，對(duì)精子頭部空泡、細(xì)胞核、頂體等超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀(guān)察，分析精子頭部空泡的物質(zhì)組成。
　　結(jié)果：
　　1、透射電鏡觀(guān)察，正常精子的質(zhì)膜和頂體膜結(jié)構(gòu)完整清晰，精子核呈梨狀，核染色質(zhì)電子密度均勻一致，精子頭部無(wú)或有少量空泡，尾部線(xiàn)粒體大小形態(tài)一致，排列規(guī)律，精子尾部微管9+2結(jié)構(gòu)完好。
　　2、不育患者精子頭部形態(tài)異常、頭部空泡多發(fā)，頂體超微結(jié)構(gòu)產(chǎn)生畸變、尾部線(xiàn)粒體數(shù)減少或分布不均、軸絲

4、9+2結(jié)構(gòu)紊亂等。
　　3、超微結(jié)構(gòu)研究表明，不明原因不育患者精子畸形高于正常生育男性，精子頭部空泡多發(fā)，空泡中含有脂類(lèi)、蛋白質(zhì)類(lèi)及核酸類(lèi)物質(zhì)。
　　結(jié)論：
　　不明原因不育癥患者精子存在頂體、精子核、線(xiàn)粒體、微管等超微結(jié)構(gòu)改變，精子頭部空泡增多等。其超微結(jié)構(gòu)異常及過(guò)多的精子頭部空泡可能是其不育原因之一，建議不明原因不育患者增加常規(guī)透射電鏡精子檢查項(xiàng)目，條件允許情況下可選擇頭部無(wú)或/少或/小空泡精子進(jìn)行胞漿內(nèi)形態(tài)學(xué)篩選